PCR儀的使用方法

來源：常州康華儀器制造廠 2023年02月08日 13:35

　　方法：

　　1、將DNA加熱（至90~95℃）變性，將雙股的DNA加熱后轉為單股DNA以做為復制的模板。

　　2、則是令Primers于一定的溫度下（冷卻至55~60℃）附著于模板DNA兩端。最后在DNA聚合酶e.g.Taq-polymerase的作用下（加熱至70~75℃）進行引物的延長Extensionofprimers及另一股的合成。

　　標準PCR儀也叫做終點PCR儀，是指目的基因僅經過預變性、變性、退火、延伸階段產生大量的核酸序列的PCR儀，PE-Cetus公司推出的第一臺PCR自動化熱循環(huán)儀屬于此種。

　　根據(jù)PCR退火溫度和擴增條件（細胞內/外），標準PCR又可以分為三類：普通PCR、梯度PCR和原位PCR。

　　PCR是分子生物學研究極其重要的工具，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，基本原理是在試管中模擬細胞內的DNA復制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復制條件，使目的DNA在細胞外完成擴增的過程，它可被看作是生物體外的特殊DNA復制。

　　擴展資料

　　1、普通PCR儀：一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的、對單一退火溫度的目的基因的擴增。主要應用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。

　　2、梯度PCR儀：普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。梯度PCR儀每個孔的溫度可以在范圍內按照梯度設置，一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)。由于被擴增的DNA片段不同，其最佳退火溫度也不同，通過梯度設置。

　　可一次性篩選出最佳的退火溫度。這樣既可節(jié)省試驗時間，提高實驗效率，又能節(jié)約實驗成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。梯度PCR儀多應用于科研、教學機構。

　　3、原位PCR儀：是將PCR技術的高效擴增與原位雜交的細胞定位結合起來，用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀，從而在組織細胞原位檢測單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技術的待檢標本一般先經化學固定，以保持組織細胞的良好形態(tài)結構。

　　細胞膜和核膜均具有一定的通透性，當進行PCR擴增時，各種成分，如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可進進細胞內或細胞核內，以固定在細胞內或細胞核內的RNA或DNA為模板，于原位進行擴增。

　　原位PCR儀對于在分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉變有著重要意義。

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