ELISA實驗是一個非常嚴謹、極其考驗操作者技巧和經(jīng)驗的實驗，檢測結(jié)果數(shù)值低、標準曲線梯度差、背景值高、變異系數(shù)大等諸多問題也是兵家常事。有很多客戶向我們咨詢，ELISA實驗結(jié)果數(shù)據(jù)總是偏低，不知道是什么問題。恒遠生物就為大家總結(jié)一下具體原因，一起來看看吧！

一、整體OD值偏低或無信號：

1.試劑盒組分失活

相應(yīng)對策：使用新的試劑盒，按照說明書要求保存試劑盒

2.試劑盒組分未平衡

相應(yīng)對策：試劑盒每個組分都需要平衡至室溫后進行實驗

3.試劑混用或混合不充分

相應(yīng)對策：保證使用試劑盒內(nèi)完整一套試劑進行實驗，保證溶液充分混合

4.洗液被污染

相應(yīng)對策：配制新的洗液

5.洗滌液浸泡時間過久或洗板次數(shù)過多

相應(yīng)對策：按照說明書的要求進行操作

6.孵育時間不充分

相應(yīng)對策：保證充足的孵育時間

7.孵育溫度不穩(wěn)定

相應(yīng)對策：檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定

8.生物su化抗體或HRP酶結(jié)合物不足

相應(yīng)對策：保證濃縮液取量準確且稀釋完

9.生物su化抗體或酶結(jié)合物稀釋不正確或步驟顛倒

相應(yīng)對策：按照說明書的步驟和要求進行操作

10. 未加終止液

相應(yīng)對策：反應(yīng)結(jié)束時，確保每孔加入終止液終止反應(yīng)

11.終止后未及時讀板

相應(yīng)對策：終止液終止反應(yīng)后需要在10min內(nèi)進行讀板操作

12.酶標儀設(shè)置錯誤

相應(yīng)對策：在酶標儀上檢查波長和濾光片設(shè)置

二、標曲線性佳但樣本OD值偏低

1.標準品部分降解

相應(yīng)對策：按照說明書推薦方式保存標準品。開封后的標準品應(yīng)以高濃度用EP管分裝凍存，保存于-20℃，半個月內(nèi)使用有效。

2.標準品復(fù)溶不當(dāng)

相應(yīng)對策：打開前將標準品短暫離心，檢查復(fù)溶后是否有未溶解的物質(zhì)

3.標準品稀釋不正確

相應(yīng)對策：按照說明書要求，保證按正確倍比梯度稀釋

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