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四環(huán)凍干機(jī)—生物制品和生物組織凍干技術(shù)（二）
5.2
菌種和疫苗的凍干
在眾多的菌種保藏方法中，冷凍真空干燥法所提供的低溫、真空條件，可使所保藏的菌種保藏更長(zhǎng)的時(shí)間。例如，王永成等人對(duì)布氏菌株的凍干進(jìn)行了研究，將凍干保存了14～19年的11株布氏菌株接種、培養(yǎng)后，對(duì)其進(jìn)行觀察，全部存活。另有報(bào)道稱凍干保存鼠疫菌25年。
而且在凍干菌株被使用時(shí)，只需提供水分使之復(fù)水即可再生，方便實(shí)際應(yīng)用。凍干菌株保藏效果也較其他方法*。
5.2.1醋酸菌菌種凍干
邵偉等人研究了醋酸菌菌種的凍干。將30℃培養(yǎng)2～3天的醋酸菌斜面，分別用3mL的5%、10%和20%的無(wú)菌脫脂牛奶洗下，制成菌懸液，充分混勻，用無(wú)菌吸管加入無(wú)菌安瓿管中。并將它們分2組分別置于-30℃或-60℃預(yù)凍2h,然后取出進(jìn)行冷凍干燥。
冷凍干燥機(jī)接通電源后，在溫度降至-40℃時(shí)，放入裝有菌體的安瓿管，開(kāi)啟真空泵，凍干機(jī)經(jīng)過(guò)3～5min溫度降至-55℃，待真空表讀數(shù)穩(wěn)定不變后，保持4～8h,然后，將安瓿管封口保存。將經(jīng)不同方式處理的醋酸菌保藏種置于4~10℃保藏一年后取出，用無(wú)菌生理鹽水溶解制成菌懸液，稀釋成不同濃度，再分別涂布于3個(gè)培養(yǎng)皿，培養(yǎng)72h觀察計(jì)數(shù)，取其平均值。預(yù)凍溫度對(duì)凍干菌的影響見(jiàn)圖5-1。
圖5-1表明，從細(xì)胞存活數(shù)的計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)來(lái)看，-60℃預(yù)凍的效果相對(duì)要好。這是因?yàn)榫?/span>懸液在-30℃預(yù)凍時(shí)，其溫度已降到冰點(diǎn)以下，但結(jié)冰不夠堅(jiān)實(shí)，真空干燥時(shí)易使菌懸液沸騰，菌體細(xì)胞受損失較多。而在-60℃預(yù)凍時(shí)，結(jié)冰速率大且堅(jiān)實(shí)，細(xì)胞損傷較少。
圖5-2是-60℃預(yù)凍并凍干的醋酸桿菌，經(jīng)不同保藏方式，在不同保藏時(shí)間后的活菌數(shù)比較。
圖5-2表明，醋酸菌在一年的保藏期內(nèi)，凍干保藏的菌種其產(chǎn)酸能力下降較少，基本能保持穩(wěn)定，而斜面保藏和液體保藏的菌種其產(chǎn)酸能力下降梯度大。可見(jiàn)，用冷凍干燥法保藏的醋酸菌在保持產(chǎn)酸能力方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
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