培養(yǎng)細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)有很多，其中很重要的一步就是為細(xì)胞選擇適合的生長(zhǎng)環(huán)境，為其選擇成分適合又營(yíng)養(yǎng)豐富的細(xì)胞培養(yǎng)基。細(xì)胞培養(yǎng)基是供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)、維持細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物，種類一般包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基以及化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基等。這其中又以基礎(chǔ)培養(yǎng)基最為常用?；A(chǔ)培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、維生素及其他輔助成分，比如 DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12，這些都是應(yīng)用非常廣泛的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基。

一些培養(yǎng)基以及適用的細(xì)胞類型：

1.RPMI-1640 Medium：

RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正?；驉盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。

2.Minimum Essential Medium（MEM）：

也稱必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細(xì)胞類型，而其它沒(méi)有特殊之處的細(xì)胞株則幾乎均可采用MEM來(lái)培養(yǎng)。

3.DMEM-高糖（標(biāo)準(zhǔn)型）：

是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。

4.DMEM-低糖（標(biāo)準(zhǔn)型）：

是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。

5.DMEM/F12：

DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1:1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12（1:1）中加入15mM HEPES緩沖液。

在確定培養(yǎng)基種類后，還會(huì)遇到培養(yǎng)基有不同分型的情況。那么對(duì)于經(jīng)典培養(yǎng)基中不同成分的作用及選擇原則又是什么呢？

1.葡萄糖（Glucose）：

作用：細(xì)胞生長(zhǎng)所需的主要能量來(lái)源。

如何選擇不同葡萄糖含量的培養(yǎng)基？

1.最初的 DMEM 中，葡萄糖濃度為 1 g/L，現(xiàn)在稱其為低糖型 DMEM，適合培養(yǎng)多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞；
2.高糖型 DMEM 中的葡萄糖濃度為 4.5 g/L，適合生長(zhǎng)速度快，附著性較差的腫瘤細(xì)胞；
3.使用無(wú)糖培養(yǎng)基的主要目的是，通過(guò)控制細(xì)胞的能量來(lái)源，研究細(xì)胞的代謝過(guò)程或葡萄糖利用效率。

2.HEPES：

作用：pH 緩沖劑。

1.是一種氫離子緩沖劑，其作用不依賴于 CO2；
2.在一定范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的 pH 范圍，保證細(xì)胞良好生長(zhǎng)；
3.部分細(xì)胞對(duì)酸堿度的變化非常敏感，建議使用 HEPES；
4.根據(jù)需要，非必需。

3.L-谷氨酰胺（L-glutamine）：

作用：L-谷氨酰胺是一種氨基酸，細(xì)胞的重要能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成，也為合成核酸提供碳源。

不足：

1.L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會(huì)自發(fā)降解；
2.降解產(chǎn)物氨對(duì)細(xì)胞有毒性；
3.對(duì)氨敏感的細(xì)胞（如干細(xì)胞和原代細(xì)胞等）或培養(yǎng)環(huán)境（高密度反應(yīng)器，無(wú)補(bǔ)料的長(zhǎng)期培養(yǎng)）不推薦含 L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基。

解決方案：

1.選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，在使用前再添加 L-谷氨酰胺，并盡快用完；
2.選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物，如 glutaGRO™。

4.酚紅（Phenol red）：

作用：pH 值的指示劑（中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色）。

何時(shí)選擇不含酚紅的培養(yǎng)基？

1.培養(yǎng)干細(xì)胞或細(xì)胞克隆時(shí)傾向于不加酚紅；
2.酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）；
3.酚紅的顏色會(huì)干擾流式檢測(cè)，不建議使用含酚紅的培養(yǎng)基制備細(xì)胞樣品（通常用 PBS）。

5.碳酸氫鈉（Sodium bicarbonate）：

作用：pH 緩沖劑。

1.pH 6.8~7.8 為細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳 pH 條件；
2.多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進(jìn)行緩沖；
3.碳酸氫鈉的緩沖需要 CO2；
 

高碳酸氫鈉(1.5~3.7 g/L)需要 5~10% CO2 培養(yǎng)；低碳酸氫鈉（0.35 g/L）不需要 CO2 培養(yǎng)。

干粉培養(yǎng)基在配制時(shí)需要單獨(dú)添加。

6.丙酮酸鈉（Sodium pyruvate）：

作用：能量來(lái)源。

1.丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源；
2.葡萄糖不足的時(shí)候，細(xì)胞可以代謝丙酮酸鈉；
3.保證細(xì)胞更好地生長(zhǎng)；
4.根據(jù)需要，非必需組分。