酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)是Engvall和Van weemen于1971年提出的。該法是以固相載體吸附技術(shù)和免疫酶技術(shù)相結(jié)合建立的一種檢測方法，其操作簡便，無需特殊設備，并具有高度的敏感性和準確性，所以受到大家的廣泛重視，以致在較短時間內(nèi)，于國內(nèi)外均取得了較快的進展。

(一) 主要的技術(shù)類型 ELISA的技術(shù)類型很多，但以檢測抗體的間接法，及測定抗原的雙抗體夾心法最chang用，現(xiàn)將其操作流程分別簡介如下。

1. 間接法首先將已知標準抗原吸附在聚苯乙烯塑料反應板的相應孔中，然后加入被檢血清，在溫箱中作用一定時間，使形成的抗原抗體復合物均勻地附著在固相載體上，再滴加用辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗免疫球蛋白，則與固相載體上的抗原抗體復合物的抗體結(jié)合，當加入底物溶液時，H2O2在酶的催化下氧化，同時使無色的顯色劑鄰苯二胺(OPD)脫氫氧化，形成可溶性的氧化型棕色聯(lián)苯胺，產(chǎn)生的顏色強度的差別，可用肉眼或特制的72型分光光度計檢測，由此推算出被檢血清中是否有相應抗體，以及含量的多少。

2. 雙抗體夾心法首先將已知抗體球蛋白吸附在載體上，致敏后，沖洗除去多余抗體，滴加被測抗原，致敏后，沖去過?？乖?，滴加酶標抗體，室溫下致敏后，沖洗除去過剩的標記抗體，加入底物溶液顯色后，再加入終止劑，以終止反應的進行，最后根據(jù)反應孔中顏色的深淺，對被檢抗原作出檢定。

(二) 在微生物檢測方面的應用   ELISA技術(shù)問世以來，已廣泛用于各種病原微生物，如病毒、細菌、真菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體等及其抗體的檢測，在微生物檢測和疾病診斷方面發(fā)揮了重要作用，通過試劑和檢測方法的標準化，組裝的ELISA診斷試劑盒，已在臨床上得到了廣泛的應用。

(三) ELISA的特點 靈敏度高，檢測能力可達10-6mg/ml水平；應用范圍廣，既能檢測抗原又能檢測抗體，既能定性又能定量；有效期長，酶標抗體于普通冰箱中可保存一年以上，效價不下降，制成的標本，可長久保存，供隨時復查用。

［附］： 免疫酶染色法(組化法) 該法的原理與免疫熒光法相似，不同之處在于用酶標記的抗體，稱酶標抗體。酶標抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當加入酶的底物時，底物在酶的催化下，發(fā)生組織化學反應，產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)不需特殊儀器，在光學顯微鏡下即能觀察，目前常用的酶是HRP，底物為DAB，可生成棕褐色沉淀物，使玻片組織標本上的抗原所在部位呈現(xiàn)顏色。