對于外泌體（Exosome）的表征，大家最為關(guān)注的想必都是它的粒徑了，但其實外泌體的濃度參數(shù)也同樣重要，因為濃度不同，外泌體樣品最終表現(xiàn)出的具體功效和能力都會有不小的差別。濃度過高，與目標(biāo)接觸不充分導(dǎo)致浪費，濃度過低則效率不足，在加上濃度可能會引起一些其他的生理變化，所以外泌體的濃度檢測實際上是非常必要的。

目前市場上的儀器像納米粒子示蹤(NTA)，納米流式（NanoFCM),納米庫爾特粒度儀（Nanocoulter）等都可以用于粒徑和濃度的表征，動態(tài)光散射（DLS）因為原理的限制只能用于粒徑的測量。

最近筆者對幾個外泌體樣品用Nanocoulter（納米庫爾特粒度儀）進(jìn)行了濃度線性的測試，結(jié)果讓人有些意外。

把1號外泌體樣品分別做10倍和2倍的5個濃度梯度，然后用納米庫爾特粒度儀（Nanocoulter）進(jìn)行測試，統(tǒng)合數(shù)據(jù)后繪圖觀察，根據(jù)最后的結(jié)果來看，線性是非常好的。

圖1：1號外泌體10倍線性圖          圖2：2號外泌體2倍線性圖

不過在測試2號外泌體樣品的時候出現(xiàn)了意外情況，如圖3所示，在1萬倍之后線性非常差，甚至趨于平直，筆者在這之后重復(fù)測試多次，發(fā)現(xiàn)在1萬倍之前的線性都比較好，但稀釋倍數(shù)超過1萬后就都是一樣的結(jié)果，此時問題已經(jīng)基本上可以確定，理應(yīng)是在某個環(huán)節(jié)引入了外源污染。

圖3：3號外泌體10倍線性圖

經(jīng)過排查驗證，最終發(fā)現(xiàn)污染源頭為稀釋樣品所使用的稀釋液，于是筆者將稀釋液進(jìn)行測試（圖4），數(shù)次測試結(jié)果都極為接近，最終平均的外源顆粒濃度在5.00E+09(Particles/mL)，該濃度與2號樣品稀釋超過1萬倍后檢測到的濃度比較接近。

圖4：污染源測試圖

確定了污染源和污染顆粒的濃度，在原來數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上將該外源顆粒的濃度減去后重新繪圖（圖5），發(fā)現(xiàn)2號外泌體的數(shù)據(jù)線性其實很好。

圖5：3號外泌體去污染10倍線性圖

總結(jié)：納米庫爾特粒度儀在外泌體濃度檢測方面擁有非常高的精度和很寬的檢測范圍，數(shù)據(jù)精準(zhǔn)，線性良好，通過線性測試還可以發(fā)現(xiàn)外泌體是否存在外源污染的問題，為相關(guān)的科研工作提供便利，是外泌體表征分析的一大利器。