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TEV重組型蛋白酶是一種常用的蛋白酶，用于在蛋白質(zhì)表達和純化過程中切割目標蛋白的亞細胞定位肽或親和標簽。在此文章中，我們將探討TEV重組型蛋白酶的起源、結(jié)構(gòu)和應用方面。
TEV全稱為煙草花葉病毒(Tobacco Etch Virus)編碼的蛋白酶，其天然形式被廣泛分布于植物體內(nèi)，能夠剪切寄生于植物細胞內(nèi)的RNA病毒基因組。人工合成的TEV重組型蛋白酶出現(xiàn)于1995年，由加拿大多倫多大學的Brian Seed教授及其同事開發(fā)制備，能夠特異性地識別和切割TEV蛋白外殼上的底物序列。隨后，該產(chǎn)品被廣泛運用于蛋白質(zhì)表達和純化中，成為生物技術(shù)領(lǐng)域的重要工具之一。
該產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性機理已經(jīng)被詳細研究。它是一種由27kDa蛋白質(zhì)構(gòu)成的單亞單位酶，具有切割底物序列ENLYFQ/G的特異性。其結(jié)構(gòu)包括一個N末端區(qū)域、一個中央峽谷和一個C末端區(qū)域。中央峽谷是TEV重組型蛋白酶與其底物序列結(jié)合的關(guān)鍵部位，其中含有兩個天然氨基酸殘基草酰胺和谷氨酰胺，能夠與底物序列內(nèi)的丙氨酸和天冬氨酸發(fā)生水解反應，從而使目標蛋白被切割成為兩段。
在蛋白質(zhì)表達和純化過程中，該產(chǎn)品常用于清除親和純化標簽或者亞細胞定位肽，從而得到純凈的目標蛋白。例如，在重組蛋白表達系統(tǒng)中，可以將目標蛋白與親和標簽如GST等融合表達，并在蛋白純化后進行TEV酶切割，以去除標簽;在細胞定位研究中，可以將熒光蛋白和其它亞細胞定位肽融合表達，然后用TEV酶去除亞細胞定位肽，以實現(xiàn)對熒光蛋白真正的定位。此外，該產(chǎn)品還可用于破壞蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，或者在結(jié)構(gòu)生物學中用于切割蛋白晶體以便進行X射線衍射分析。
綜上所述，TEV重組型蛋白酶是一種常用的蛋白酶，其起源于植物病毒，結(jié)構(gòu)特異性地識別和切割底物序列ENLYFQ/G。在蛋白質(zhì)表達和純化、蛋白質(zhì)相互作用
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