如何進(jìn)行CCK-8實驗，操作步驟有哪些？

來源：浙江聯(lián)碩生物科技有限公司 2023年07月06日 13:37

1）制備細(xì)胞懸液，計數(shù)。

2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個重復(fù)。

3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時間（37℃, 5%CO2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去。

4）每孔各加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比較少，可能會因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。

5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h。因為細(xì)胞種類不同，形成的formazan的量也不一樣，所以如果顯色不夠的話，可以延長培養(yǎng)時間，特別是血液細(xì)胞形成的formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6h）。

6）酶標(biāo)儀測定450nm處的吸光值（OD）。

7）若暫時不測定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室溫下避光保存，這樣可以保證OD值在24h內(nèi)不發(fā)生變化。

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