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每一個(gè)實(shí)驗(yàn)新手們剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室操作細(xì)胞，都是緊張興奮又手忙腳亂，就從最基本的養(yǎng)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，大家剛開始一定覺得理論知識(shí)看起來(lái)很容易，但是，在實(shí)際情況中一般是這樣的——“到底怎么回事，細(xì)胞長(zhǎng)不好/細(xì)胞又死了/又污染了......"
這時(shí)，如果有一份靠譜的細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，或許可以幫助你少走彎路，今天就為大家分享一下由我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的知識(shí)總結(jié)，讓你事半功倍。
首先，我們來(lái)看看，什么是細(xì)胞培養(yǎng)：
細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無(wú)菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。
細(xì)胞真的很脆弱，就像小嬰兒一樣，需要你無(wú)微不至的關(guān)懷。
培養(yǎng)細(xì)胞之前，你需要做好這些準(zhǔn)備：
1、耗材的處理、
玻璃器皿的清洗，對(duì)于玻璃器皿(細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干凈(注意死角)，然后沖干凈。用酸液浸泡24 h以上，之后用清水沖洗數(shù)遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過(guò)程要使勁搖晃。
2、試劑的配置
試劑配置，細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調(diào)節(jié)。
3、無(wú)菌檢驗(yàn)
無(wú)菌檢驗(yàn)，主要采用過(guò)濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如PBS、D-Hank's等。
不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求是不同的，要根據(jù)自己的細(xì)胞要求使用。
細(xì)胞培養(yǎng)中最重要的步驟——無(wú)菌操作
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并開啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。
每次操作只處理一株細(xì)胞株，避免細(xì)胞間交叉污染。
實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，再次以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域，一般不要再邊緣區(qū)域操作。
細(xì)胞培養(yǎng)后期——定期觀察
你最好做到每天都去探望探望它們，看看他們的成長(zhǎng)情況
1、檢查培養(yǎng)液顏色與透明度的變化，顏色變黃，說(shuō)明PH值下降;變紅或紫紅色，說(shuō)明PH值上升，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、死亡，一般生長(zhǎng)穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次，生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次。
2、觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的80%，應(yīng)及時(shí)傳代。
3、觀察細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓清晰為佳。
4、注意微生物污染，常常出現(xiàn)培養(yǎng)液混濁，液體內(nèi)漂菌絲或細(xì)胞菌，不僅僅指微生物，包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物及細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)之——污染篩查
你培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了，無(wú)非是下面幾個(gè)污染途徑：
1、空氣是微生物傳播的最主要途徑，操作時(shí)盡量避免說(shuō)話、咳嗽、打噴嚏;
2、使用的培養(yǎng)器械及器皿清洗消毒不干凈;
3、培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞時(shí)，操作不規(guī)范，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染;
4、血清有問(wèn)題，可能血清在生產(chǎn)時(shí)就已經(jīng)被支原體或病毒污染;
5、原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來(lái)源于組織樣本。
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