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抗體的選擇和保存指南

來源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2023年08月30日 10:20  
一、怎樣選擇適合你實驗需要的抗體?
1. 一抗選擇要點
(1)確定抗體的名字,注意中英文名字、它名、亞型等信息。
(2)確定你的實驗類型,Elisa,WB,IHC,ICC,還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型,如果抗體說明 書沒有提及的應用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證,請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的 抗體。
(3)確定實驗樣本的種屬,Human,Mouse,還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗,請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。
(4)樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體,待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構象的改變,會影響抗體的免疫親和反應。
(5)單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
 
2. 二抗選擇要點
(1)種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗,以與后面的SP結合反應,而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
 
二、抗體的穩(wěn)定性
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結果??贵w是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一,其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結果。在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結構。
2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下,甚至短時間溫度達到50-60℃,抗體分子都能維持正確折疊,保持應有的活性。
3. 抗體的純度。采用先進的抗體純化技術,確保抗體產(chǎn)品的高純度,保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質損失,高濃度的抗體穩(wěn)定性更好,抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。

 
四、怎樣保存已獲得的抗體?
抗體無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反復凍融,收到抗體后請根據(jù)實驗的需要,對抗體進行分裝,避免同一管抗體反復凍融(反復凍融會導致抗體空間結構變 性,導致多聚體形成,從而降低抗體的結合能力)??贵w保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果,如果抗體保存得當,抗體活性大部分都可以維持數(shù)年。 請謹記,無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。
 
1. 收到抗體后,請務必在4℃,12000rpm,離心3分鐘,(無論是液體還是凍干粉狀態(tài)),再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長 離心時間至5分鐘,以保證全部抗體均離心下來)。抗體一般使用特制的儲存管,只有在12000rpm離心3分鐘,才能將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下 來(即使是在10000rpm離心也會離心不好,導致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象)。
 
2. 對于ProSci大部分抗體,比較合適的保存方式是,分裝后保存在-20℃或者-80℃。
(1)對絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20℃就足夠了,沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會更好。
(2)分裝可以降低反復凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
(3)分裝的量以一次實驗用完為好,最少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。
(4)復融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來。
(5)抗體工作液應該當天配制當天用完,4℃保存盡量不要超過1天。
(6)絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中,將抗體保存在冰箱里層,避免溫度變化造成反復凍融。
 
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。
 
4. 大部分抗體的運輸條件:一般的運輸過程需要1~2周的時間,所以是在低溫4℃的條件下來完成的。
4℃運輸最主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過程),所以運輸過程中絕對避免干冰運輸。

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