制作標準曲線

1、計數，按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做5-7個細胞濃度梯度，每組4-6個復孔。

2、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后每100μL培養(yǎng)基加10uL CCK-8（注意不要在孔中生成氣泡，會影響OD值）試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)培育1-4小時。用酶標儀測定450nm處的吸光度。

計算所需培養(yǎng)液

可以先轉染再種板

在10cm盤轉染，6h后消化，重懸細胞，技術，調細胞密度為20000個/ml，種在96孔板，每孔1000μL。

種板時，槍頭吹吸細胞，重懸，均勻分散。也可以轉染和種板同時進行，轉染6h后換液，每孔100μL新鮮DMEM。

細胞增殖-毒性檢測

(細胞活性檢測不進行2、3步驟)

1、在96孔板中接種細胞懸液(100uL/孔，每孔細胞數至少1000)，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)24小時;

2、向培養(yǎng)板加入不同濃度的待測藥物;

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當的時間；加培養(yǎng)基(完培，基培皆可)，孵育6小時（具體按各自試驗決定），空白孔記得加培養(yǎng)基。

4、向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡);(不用更換培養(yǎng)基)直接加

5、將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內孵育1-4小時; f.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。