小鼠孕酮(P)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                                                                                    96T
30ng/L -800 ng/L
 
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中孕酮(P)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠孕酮(P)水平。用純化的小鼠孕酮(P)抗體包
被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕酮(P)，再與HRP標記的孕酮(P)
抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在
HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
孕酮(P)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品
中小鼠孕酮(P)濃度。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品(1600ng/L)  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
800ng/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
400ng/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
200ng/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
100ng/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
50ng/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
 
 
2.  加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同) 、標準孔、
待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
 
 
計算
    以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的OD值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。   注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值) ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個月