HGC-27細胞培養(yǎng)指南 | 實驗步驟與防污染技巧(新手必讀)
HGC-27細胞是一種來源于人胃癌患者轉移性淋巴結的低分化胃癌細胞系,具有較強的侵襲性和增殖能力,常用于研究胃癌的分子機制、藥物篩選以及侵襲與轉移特性分析。它在體外呈上皮樣貼壁生長,呈多角形或短梭形,以單層形式生長。能夠在免疫缺陷小鼠中形成移植瘤,是胃癌相關研究的重要模型。
一、實驗準備(關鍵物料清單)
? 細胞來源:建議從ATCC/中科院細胞庫獲?。ㄅ柨伤菰矗?br style="--tw-border-spacing-x:0; --tw-border-spacing-y:0; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-gradient-from-position: ; --tw-gradient-via-position: ; --tw-gradient-to-position: ; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:#3b82f680; --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; box-sizing: inherit;"/>? 培養(yǎng)基:RPMI-1640 + 10% FBS + 1%雙抗(Gibco品牌優(yōu)選)
? 儀器:37℃恒溫CO?培養(yǎng)箱(CO?濃度5%)、生物安全柜(潔凈度100級)
二、詳細培養(yǎng)步驟
1. 復蘇操作
快速解凍37℃水浴≤2分鐘離心去DMSO1000rpm×5min重懸接種初始密度2×10? cells/cm2
?? 防凍傷要點:解凍后立即轉移至預溫培養(yǎng)基
2. 傳代方法
消化控制:0.25%胰酶(含EDTA)作用2-3分鐘(鏡下觀察細胞變圓)
終止技巧:加入含血清培養(yǎng)基(體積≥3倍消化液)
分瓶比例:1:3至1:4(24-48小時可達80%融合度)
3. 凍存方案
凍存液配方:90% FBS + 10% DMSO(現用現配)
程序降溫:4℃ 30min → -20℃ 2h → 液氮長期保存
三、培養(yǎng)問題排查(附解決方案)
常見問題 | 原因分析 | 應對措施 |
---|---|---|
增殖緩慢 | 血清批次差異/FBS濃度不足 | 更換優(yōu)質血清(≥南美產地) |
細胞漂浮 | 消化過度/支原體污染 | 縮短消化時間/PCR檢測 |
黑點污染 | 真菌孢子污染 | 棄用全批+環(huán)境紫外滅菌 |
?? 注意事項(提升實驗成功率)
狀態(tài)監(jiān)控:每日觀察細胞形態(tài)(貼壁率<50%需排查)
傳代周期:不超過30代(建議定期STR鑒定)
污染預防:操作前紫外滅菌30min,試劑瓶酒精噴淋
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