二氧化碳搖床(CO?搖床)是一種結(jié)合了恒溫?fù)u床和二氧化碳?xì)怏w控制的培養(yǎng)設(shè)備,主要用于細(xì)胞或微生物的振蕩培養(yǎng)。其核心原理是通過模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境(如溫度、氣體、pH等),為細(xì)胞或微生物提供優(yōu)化的生長條件。以下是其培養(yǎng)原理的詳細(xì)解析:
1. 二氧化碳的作用
維持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定:
大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基(如DMEM、RPMI 1640)含有碳酸氫鈉(NaHCO?)緩沖系統(tǒng),其pH會隨CO?濃度變化。當(dāng)CO?溶解于培養(yǎng)基中時(shí),形成碳酸(H?CO?),進(jìn)而解離為H?和HCO??,與培養(yǎng)基中的NaHCO?共同維持pH在7.2 7.4(通常5% CO?對應(yīng)此范圍)。
公式:CO? + H?O ? H?CO? ? H? + HCO??
滿足特定細(xì)胞代謝需求:
某些細(xì)胞(如哺乳動(dòng)物細(xì)胞)依賴CO?參與代謝(如脂類合成、尿素循環(huán))。
2. 搖床的振蕩功能
促進(jìn)氣體與營養(yǎng)交換:
振蕩(通常轉(zhuǎn)速50 300 rpm)使培養(yǎng)液均勻混合,避免細(xì)胞沉積,同時(shí)增強(qiáng)氧氣和CO?的溶解效率,防止局部代謝廢物堆積。
模擬動(dòng)態(tài)微環(huán)境:
某些細(xì)胞(如貼壁細(xì)胞在微載體上)需要機(jī)械刺激以促進(jìn)生長或表達(dá)特定功能。
3. 溫度控制
恒溫系統(tǒng):
通常維持在37℃(哺乳動(dòng)物細(xì)胞)或其他特定溫度(如30℃用于酵母),通過電熱絲或水浴加熱,配合高精度傳感器(±0.1℃)保持穩(wěn)定。
4. 濕度控制(可選)
減少蒸發(fā):
部分設(shè)備配備濕度模塊,防止培養(yǎng)液蒸發(fā)導(dǎo)致的滲透壓變化,尤其對長期培養(yǎng)至關(guān)重要。
5. 應(yīng)用場景
細(xì)胞培養(yǎng):
貼壁細(xì)胞(需微載體)或懸浮細(xì)胞(如雜交瘤細(xì)胞)的擴(kuò)增。
微生物培養(yǎng):
需CO?的微生物(如某些細(xì)菌、真菌)或厭氧菌(結(jié)合氧氣控制)。
生物反應(yīng)研究:
如酶反應(yīng)、藥物代謝等需動(dòng)態(tài)環(huán)境的實(shí)驗(yàn)。
6. 關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化
CO?濃度:
通常5%(哺乳動(dòng)物細(xì)胞),但需根據(jù)培養(yǎng)基配方調(diào)整(如某些無血清培養(yǎng)基需7 10%)。
振蕩速度:
過高可能導(dǎo)致細(xì)胞機(jī)械損傷,過低則混合不充分。
培養(yǎng)容器:
透氣蓋培養(yǎng)瓶(允許氣體交換)或密封瓶(需精確控制CO?輸入)。
7. 注意事項(xiàng)
污染防控:
定期消毒搖床腔體,使用抗生素(如青霉素 鏈霉素)防止污染。
校準(zhǔn):
CO?傳感器和溫度探頭需定期校準(zhǔn),避免偏差。
安全:
高濃度CO?可能對人體有害,需確保設(shè)備密封性和實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)。
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