HPLC常見(jiàn)問(wèn)題解決

來(lái)源：北京華志色譜科技有限公司 2014年08月04日 16:48

　　一、用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?

　　答：關(guān)于漂移問(wèn)題：

　　1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等

　　3、柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡

　　關(guān)于快速變化問(wèn)題

　　1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定

　　2、泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。

　　3、流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合。

　　二、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法?

　　答：1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量

　　2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

　　3、樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器

　　4、檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可。

　　5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

　　6、檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。

　　7、檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣。

　　8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。

　　9、流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可。

　　10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。

　　三、做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在?如何解決?

　　答：原因可能有：

　　1、泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理;

　　2、比例閥失效，更換比例閥即可。

　　3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

　　4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法;

　　5、系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可。

　　6、梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

　　四、為什么HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高?

　　答：柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶zui常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。

　　1、拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查;

　　2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

　　3、將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，(此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性)。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查;

　　4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商。

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