R&D systems公司 ELISA 酶聯(lián)吸附免疫法Q&A

問(wèn)：R&D Systems的Quantikine試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經(jīng)檢驗(yàn)的）樣本？

答：很遺憾，R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對(duì)Quantikine系列的試劑盒做效果驗(yàn)證。如果要決定試劑盒是否可用于未經(jīng)檢定的樣本，實(shí)驗(yàn)者先做一個(gè) “摻入和回收預(yù)試驗(yàn)”。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標(biāo)準(zhǔn)，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過(guò)的一份同未摻 入的一份相比。采用以下的公式來(lái)計(jì)算回收率（%）：測(cè)試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來(lái)說(shuō)，回收率在80-120%可認(rèn)為是可接受的。但是，可接受范圍應(yīng)由每一實(shí)驗(yàn)室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細(xì)的“摻入和回收”的實(shí)驗(yàn)步驟，可向我們的技術(shù)服務(wù)部索取。我們也可進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)看一看是否有其他試驗(yàn)人 員用我們的產(chǎn)品做過(guò)不同的樣本，或不同的屬種。

問(wèn)：加入稀釋劑是否會(huì)將樣本進(jìn)一步稀釋？

答：因?yàn)橄♂寗┦羌尤氲剿械目字?，?biāo)準(zhǔn)和被測(cè)樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。

問(wèn)：我是否可將標(biāo)準(zhǔn)曲線的兩端延伸？

答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在我們確定的測(cè)試范圍，我們保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

問(wèn)：為什么不將測(cè)試范圍延伸到所述的靈敏度？

答：靈敏度是統(tǒng)計(jì)中大于零的可測(cè)到的zui低值。它是通過(guò)本底信號(hào)和試驗(yàn)的可變性計(jì)算出來(lái)的。靈敏度是將20個(gè)零復(fù)制物的中值加兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點(diǎn)，因而是可定量的。

問(wèn)：Quantikine試劑盒中的試劑是否可互換？

答：如果試劑盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀釋劑有相同的組件號(hào)和批量號(hào)，它們可以互換。R&D Systems做“整個(gè)試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說(shuō)，我們不支持不同批號(hào)之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。

問(wèn)：Quantikine試劑盒中的洗液是否可互換？

答：如果組件號(hào)相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑 盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會(huì)干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅(qū)動(dòng) 的信號(hào)擴(kuò)增。

問(wèn)：在某些實(shí)驗(yàn)中為什么必須使用聚丙烯（polypropylene）的試管做標(biāo)準(zhǔn)稀釋？

答：有些細(xì)胞分子會(huì)粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。

問(wèn)：在Quantkine試劑盒中沒(méi)有足夠的RD5校正物來(lái)稀釋我的細(xì)胞上清液，我該怎么辦？

答：你可用細(xì)胞培養(yǎng)液來(lái)做起始的稀釋，直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來(lái)稀釋。