親水作用色譜（HILIC）已經(jīng)作為一種分離強極性化合物的工具得到廣泛應用。事實上，它已經(jīng)成為一種較為普遍的小分子分離技術(shù)。相比之下，即使HILIC的分離選擇性在某些情況下（如在糖基化蛋白質(zhì)的表征中）具有很大價值，HILIC在大分子方面的應用仍相對有限。分析蛋白糖基的一種標準方法是通過酶或化學方法將其從對應蛋白質(zhì)中釋放出來，然后采用HILIC進行色譜分離。以經(jīng)過優(yōu)化的亞2 μm酰胺鍵合固定相為基礎(chǔ)的UPLC型分離通過提高分離速度與分離度，*顛覆了游離蛋白糖基的HILIC分離。盡管游離糖基分析是一種黃金標準方法，但一直以來它都需要冗長而繁瑣的樣品制備技術(shù)。雖然zui近推出的GlycoWorks™RapiFluor-MS™ N-糖分析試劑盒能夠彌補多數(shù)不足，但在有些情況下仍需要研究表征糖基化蛋白的替代方法，例如在需要闡明修飾位點時。

為了在糖基仍連接在對應蛋白質(zhì)上時即對其進行補充分析，我們推出了經(jīng)優(yōu)化的HILIC固定相及相應方法用于分離完整糖蛋白和消化糖蛋白的糖型。研究采用大孔徑（300Å）酰胺鍵合有機硅（亞乙基橋雜化，BEH）固定相和精心開發(fā)的方法，實現(xiàn)了對質(zhì)量范圍為10~150 kDa的完整蛋白質(zhì)糖型的出色分離。