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人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)試劑盒使用說明書

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    2013年08月05日
關(guān)鍵詞
試劑盒
上傳者
上海欣美生物科技有限公司
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資料簡介

 實驗原理

 
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)水平。用純化的人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入t-PA,再與HRP標記的組織型纖維溶酶激活物(t-PA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的t-PA呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)濃度。 
 
試劑盒組成 
 
1
 20倍濃縮洗滌液
 30ml×1瓶
 7
 終止液
 6ml×1瓶
 
2
 酶標試劑
 6ml×1瓶
 8
 標準品(18μg/L)
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶標包被板
 12孔×8條
 9
 標準品稀釋液
 1.5ml×1瓶
 
4
 樣品稀釋液
 6ml×1瓶
 10
 說明書
 1份
 
5
 顯色劑A液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 2張  
 
6
 顯色劑B液
 6ml×1/瓶
 12
 密封袋
 1個
 
 
 
標本要求 
 
1.標本采集后盡早進行實驗。
 
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 
3.可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 
操作步驟
 
1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為(12μg/L,8μg/L ,4μg/L,2μg/L,1μg/L)。
 
2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
 
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
 
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
 
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
 
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
 
7.         溫育:操作同3。
 
8.         洗滌:操作同5。
 
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
 
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
 
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
 
 
計算
 
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 
 
注意事項
 
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
 
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
 
4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 
5.  嚴格按說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
 
6.底物請避光保存。
 
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
 
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
 
9.本試劑不同批號組分不得混用。
 
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
 
檢測范圍:
 
0.5μg/L -15μg/L
 
規(guī)格:
 
96人份/盒
 
保存條件及有效期
 
1.試劑盒保存:;2-8℃。
 
2.有效期:6個月
 

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