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原代組織細(xì)胞的解離2011/05/17: 膠原酶1．用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用Hanks平衡鹽溶液（HBSS）將組織碎塊清洗數(shù)次。2．加入膠原酶（50-200單位/ml膠原酶HBSS）。3．在37℃下孵育4-18小時(shí)。加入3mMCaCl2可以提高解離效率。4．用滅菌的不銹鋼網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞懸浮液，將離散的細(xì)胞和組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進(jìn)一步解離，可向組織片段中加入新鮮的膠原酶。5．通過離心HBSS清洗細(xì)胞懸浮液數(shù)次。6．用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。計(jì)算細(xì)胞個(gè)數(shù)，然后接種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。分散酶1．用滅菌的解剖刀或

自由基的產(chǎn)生方法2011/05/16: 自由基的產(chǎn)生方法自由基，化學(xué)上也稱為“游離基”，是含有一個(gè)不成對(duì)電子的原子團(tuán)。由于原子形成分子時(shí)，化學(xué)鍵中電子必須成對(duì)出現(xiàn)，因此自由基就到處奪取其他物質(zhì)的一個(gè)電子，使自己形成穩(wěn)定的物質(zhì)。在化學(xué)中，這種現(xiàn)象稱為“氧化”。我們生物體系主要遇到的是氧自由基，例如超氧陰離子自由基、羥自由基、脂氧自由基、二氧化氮和一氧化氮自由基。加上過氧化氫、單線態(tài)氧和臭氧，通稱活性氧。體內(nèi)活性氧自由基具有一定的功能，如免疫和信號(hào)傳導(dǎo)過程。但過多的活性氧自由基就會(huì)有破壞行為，導(dǎo)致人體正常細(xì)胞和組織的損壞，從而引起多種疾病

真空干燥箱使用安全知識(shí)2011/05/13: 真空干燥箱使用安全知識(shí)1.真空箱應(yīng)在相對(duì)濕度≤85%RH，周圍無腐蝕性氣體、無強(qiáng)烈震動(dòng)源及強(qiáng)電磁場(chǎng)存在的環(huán)境中使用。2.真空箱工作室無防爆、防腐蝕等處理，不得放易然、易爆、易產(chǎn)生腐蝕性氣體的物品進(jìn)行干燥。3.真空泵不能長時(shí)期工作，因此當(dāng)真空度達(dá)到干燥物品要求時(shí)，應(yīng)先關(guān)閉真空閥，再關(guān)閉真空泵電源，待真空度小于干燥物品要求時(shí)，再打開真空閥及真空泵電源，繼續(xù)抽真空，這樣可延長真空泵使用壽命。4.干燥的物品如潮濕，則在真空箱與真空泵之間加入過濾器，防止潮濕氣體進(jìn)入真空泵，造成真空泵故障。5.干燥的物品如

糖無氧酵解的具體問題2011/05/12: 糖無氧酵解的具體問題1.概念：在無氧情況下，葡萄糖分解生成乳酸的過程。2.反應(yīng)過程糖酵解分三個(gè)階段（1）*階段：引發(fā)階段。由葡萄糖生成1，6-果糖二磷酸①葡萄糖的磷酸化、異構(gòu)化、再磷酸化生成1，6-果糖二磷酸：葡萄糖磷酸化成為葡萄糖-6-磷酸，由己糖激酶催化。為不可逆的磷酸化反應(yīng)，酵解過程關(guān)鍵步驟之一，是葡萄糖進(jìn)入任何代謝途徑的起始反應(yīng)，消耗1分子ATP。②葡萄糖-6-磷酸轉(zhuǎn)化為果糖-6-磷酸，磷酸己糖異構(gòu)酶催化；③果糖-6-磷酸磷酸化，轉(zhuǎn)變?yōu)橛?磷酸果糖激酶催化，消耗1分子ATP，是第二個(gè)不可

冰醋酸使用安全2011/05/11: 冰醋酸使用安全1、毒性屬低毒類，可經(jīng)消化道、呼吸道、皮膚吸收，對(duì)眼、皮膚和上呼吸道有刺激作用。2、短期過量暴露的影響吸入：吸入較高濃度的乙酸氣溶膠，可出現(xiàn)咳嗽、呼吸困難、咽部刺激、咽干、鼻分泌物增加、鼻出血、頭疼等刺激性癥狀。眼睛接觸：引起眼瞼水腫、結(jié)膜充血。皮膚接觸：輕者出現(xiàn)紅斑，重者出現(xiàn)化學(xué)灼傷，有水泡和疼痛。3、長期暴露的影響長期吸入乙酸蒸氣或氣溶膠可對(duì)人體產(chǎn)生慢性作用，出現(xiàn)咳嗽、咳痰、胸部緊迫感及鼻卡他鼻竇炎等癥狀。個(gè)別的接觸者引起哮喘發(fā)作，局部皮膚發(fā)黑和角化、鼻黏膜和牙齒的腐蝕斑和貧血

關(guān)于阿莫西林2011/05/10: 關(guān)于阿莫西林阿莫西林（Amoxicillin），又名安莫西林或安默西林，是一種zui常用的青霉素類廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素，為一種白色粉末，半衰期約為61.3分鐘。在酸性條件下穩(wěn)定，胃腸道吸收率達(dá)90。阿莫西林殺菌作用強(qiáng)，穿透細(xì)胞壁的能力也強(qiáng)。是目前應(yīng)用較為廣泛的口服青霉素之一，其制劑有膠囊、片劑、顆粒劑、分散片等等。青霉素過敏及青霉素皮膚試驗(yàn)陽性患者禁用。阿莫西林為半合成廣譜青霉素類藥，抗菌譜及抗菌活性與氨芐西林基本相同，但其耐酸性較氨芐西林強(qiáng)，其殺菌作用較后者強(qiáng)而迅速，但不能用于腦膜炎的治療。

瓊脂糖的優(yōu)點(diǎn)2011/05/09: 目前多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳，其優(yōu)點(diǎn)如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳。（2）瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻，含水量大（約占98%~99%），近似自由電泳，樣品擴(kuò)散較自由電流，對(duì)樣品吸附極微，因此電泳圖譜清晰，分辨率高，重復(fù)性好。（3）瓊脂糖透明無紫外吸收，電泳過程和結(jié)果可直接用紫外光燈檢測(cè)及定量測(cè)定。（4）電泳后區(qū)帶易染色，樣品極易洗脫，便于定量測(cè)定。制成干膜可長期保存。目前，常用瓊脂糖作為電泳支持物，分離蛋白質(zhì)和同工酶。將瓊脂糖電泳與免疫化學(xué)相結(jié)合，

劉氏染液介紹2011/05/05: 劉氏染色液在臨床上的應(yīng)用非常廣泛，除了主要作為血球形成分類染色之外，亦可用于骨髓抹片、瘧疾和血液寄出蟲之快速染色；也可以當(dāng)作組組學(xué)抹片的簡易染色。操作所須時(shí)間極短，只要2分種即可完成所有。細(xì)胞的著色過程是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理吸附作用，又有化學(xué)親和作用?！げ襟E簡單，易操作·染色效果優(yōu)于瑞氏染液（Wright'sstain），顏色鮮明，判讀容易標(biāo)準(zhǔn)染法1.加LiuASolution（約1-2ml）染色30秒后。2.再將LiuBSolution滴加于A液上面（滴加之量約

細(xì)胞的復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)2011/05/04: 細(xì)胞的復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)一.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。二．取出凍存管：1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。三．迅速解凍：1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。四.平衡離

抗血清的原理2011/05/03: 抗血清的原理原理：抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清，一般為動(dòng)物被人工注射某類抗原后制備的動(dòng)物血清。價(jià)的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。一種抗原能否引起抗體生成反應(yīng)，一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇（Antigenicdeterminant），另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)，當(dāng)具備以上兩個(gè)條件后，抗體生成將遵循抗體生成的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)。抗原的種類繁多，包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫動(dòng)物具有不同的特殊性。一

血?dú)夥治鏊釅A失衡的判斷2011/04/29: 血?dú)夥治鏊釅A失衡的判斷酸堿平衡紊亂的診斷可分為兩步：*步：初步觀察pH、PCO2：以及酸堿指標(biāo)來判斷歸于代謝性酸中毒、代謝性堿中毒、呼吸性酸中毒及呼吸性堿中毒4種中的哪一種基本的紊亂類型，進(jìn)而判斷機(jī)體的代償情況。應(yīng)將酸堿紊亂的時(shí)間因素考慮在內(nèi)。通氣換氣來代償代謝性紊亂幾乎是立刻就開始的，并在12h達(dá)到峰值。腎臟對(duì)通氣障礙的代償則需等到第二天才顯現(xiàn)出來，并于6天左右完成。第二步：酸堿平衡紊亂的病因診斷，應(yīng)包含：①病人的一般體征、病史、神志、水平衡狀態(tài)和目前的用藥情況。②電解質(zhì)情況，尤其是鉀離子、氯

試劑盒簡介2011/04/28: 試劑盒簡介試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中山羊內(nèi)啡肽（EP）水平。用純化的山羊內(nèi)啡肽（EP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)啡肽（EP），再與HRP標(biāo)記的內(nèi)啡肽（EP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)啡肽（EP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中山羊內(nèi)啡肽（EP）濃度。樣本處理及要求：1.血清：室

白細(xì)胞介素的概念以及發(fā)現(xiàn)過程和用途2011/04/27: 白細(xì)胞介素的概念以及發(fā)現(xiàn)過程和用途由于zui初是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。白細(xì)胞介素interleukin縮寫為IL。關(guān)于免疫反應(yīng)的表達(dá)和調(diào)節(jié)，有來源于淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞等許多因子參與。來源于淋巴細(xì)胞的有淋巴細(xì)胞活素，來源于巨噬細(xì)胞的總稱為monokine，其中的各個(gè)因子的生物活性各有不同（例如巨噬細(xì)胞活化，促進(jìn)T細(xì)胞繁殖等），因子自身的物理化學(xué)性質(zhì)多不清楚。1979年這方面的研究團(tuán)體提出了在淋巴細(xì)胞活素及巨噬細(xì)胞因子（monoki－ne）中，已作為一種分子提

培養(yǎng)基的分類方式2011/04/26: 培養(yǎng)基的分類方式一.按成分的不同分1．天然培養(yǎng)基主要成分是復(fù)雜的天然有機(jī)物質(zhì)，如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。這些復(fù)雜天然有機(jī)物質(zhì)的成分不*了解，每次所用的原料，其中各成分的數(shù)量也不恒定。這類培養(yǎng)基是實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)基，例如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基等。2．合成培養(yǎng)基用化學(xué)成分*了解的純?cè)噭┡渲贫傻呐囵B(yǎng)基，如高氏1號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基等。一般用于營養(yǎng)代謝、分類鑒定、菌種選育、遺傳分析等。二．按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分1．固定培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑即為固體培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)用的凝固劑

血清前白蛋白的臨床應(yīng)用2011/04/25: 血清前白蛋白的臨床應(yīng)用近來BECKMAN公司新生產(chǎn)的PAB（Prealbumin）前白蛋白試劑在全自動(dòng)生化分析儀上試運(yùn)行。此試劑盒采用免疫透射比濁法,測(cè)定準(zhǔn)確，速度快，血清前白蛋白在臨床上有較廣泛的應(yīng)用，適合于開展常規(guī)項(xiàng)目。1血清前白蛋白（Prealbumin）是評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)患者營養(yǎng)狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)，可早期認(rèn)識(shí)營養(yǎng)缺乏，幫助患者盡快康復(fù)，降低并發(fā)癥。前白蛋白在肝臟和胃腸黏膜細(xì)胞產(chǎn)生，可代表臟器蛋白質(zhì)狀況，半衰期短（2d），排除迅速，對(duì)營養(yǎng)狀況的急性改變很敏感。處于營養(yǎng)不良危險(xiǎn)狀態(tài)的人員應(yīng)該監(jiān)測(cè)前白蛋白

改良Lowry法蛋白定量試劑盒2011/04/22: 改良Lowry法蛋白定量試劑盒許多年來Lowry法是zui常用也是被引用次數(shù)zui多的蛋白質(zhì)定量方法。其原理是在堿性條件和福林酚Folin-CiocalteuReagent存在下，銅離子與蛋白質(zhì)形成可溶性蘭色復(fù)合物，在750nm有zui大光吸收值。Lowry法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，對(duì)脂質(zhì)、SDS等干擾物質(zhì)不甚敏感。經(jīng)典Lowry法的主要缺點(diǎn)是，每次蛋白定量之前必須用兩種不同的試劑A和B（ReagentAａndB）新鮮配制堿性銅試劑（ReagentC）。堿性銅試劑（ReagentC）不穩(wěn)定因而必須每天

一抗的選擇2011/04/21: 一抗的選擇檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：1.分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析等，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗(yàn)。2.樣本的物種應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋

細(xì)胞培養(yǎng)基分類2011/04/20: 細(xì)胞培養(yǎng)基分類培養(yǎng)是既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的種類很多，按其物質(zhì)狀態(tài)分為半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類；按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。1、天然培養(yǎng)基：使用zui普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清zui普遍。血清由于含有多種細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)。與合志培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞碩利增殖生長。常見使用zui為5-20%。2、合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞所需物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨

特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基2011/04/12: 培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒有zui終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)

神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)總結(jié)2011/04/12: 培養(yǎng)細(xì)胞的*培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如MEM）和添加劑（如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子）組成，培養(yǎng)基的配方一直在改進(jìn)，其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等?；A(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`sMEM的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`sF12也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12這兩種培養(yǎng)

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