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線粒體的活體染色的及電鏡照片觀察2015/08/13

實驗原理線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所。細(xì)胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。實驗試劑1.l／300詹納斯綠B染液2.Ringer氏液(哺乳類用)實驗設(shè)備1.顯微鏡2.手術(shù)器材一套3.解剖盤4.小平皿5.載片6.蓋片7

成年豬胰島分離純化方法的優(yōu)化2015/08/13

實驗試劑膠原酶V，512kut/mg(Sigma公司)，DNA酶(Sigma公司)，胎牛血清(Gibco公司)，RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco公司)，Dextran(Pharmacia公司)，Hanks平衡鹽溶液(Gibco公司)。實驗設(shè)備離心機，注射器，顯微鏡，超凈工作臺等。實驗材料成年雜種豬，豬齡12mo，體質(zhì)量150kg左右，豬被屠宰放血后，在相對無菌條件下迅速取出胰腺，保存于4℃Hanks液中送至實驗室，熱缺血時間少于10min，冷缺血時間少于90min。實驗步驟1.胰島分離胰腺取回

小麥總RNA的提取2015/08/13

實驗步驟1.所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配制，高溫滅菌。2.在一滅菌2mL管中加入：5mol/L異硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0)0.1mL。3.稱取0.2g小麥黃化苗的葉片，迅速在液氮中研磨成粉末，轉(zhuǎn)入已準(zhǔn)備好的離心管中，劇烈震蕩。4.混勻，冰浴30min。5.4℃，12000rpm，10min。6.上清至另一離心管中加0.4mL氯仿，劇烈震蕩。冰浴放置5min。7.4℃，12000rpm，10min。8.棄有機相(下層)加入0.4mL

葡萄糖在小鼠克隆胚胎發(fā)育中的作用2015/08/05

實驗步驟1.克隆胚胎制備和胚胎培養(yǎng)卵母細(xì)胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培養(yǎng)液中培養(yǎng)。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml細(xì)胞松弛素B的HEPES-CZB液(HCZB)作為工作液，卵母細(xì)胞在此液中被去掉紡錘體-染色體復(fù)合體；用卵丘細(xì)胞作為核供體。用注射針反復(fù)吸入、吹出卵丘細(xì)胞，以除去其細(xì)胞膜和大部分細(xì)胞質(zhì)，然后用注射針將裸卵的核注入去除紡錘體-染色體復(fù)合體的卵母細(xì)胞中。孤雌胚胎所用的卵母細(xì)胞與用于制備核移植胚胎的卵母細(xì)胞來源相同。孤雌胚胎和核移植胚胎用不含Ca2、卻含10mMSr2和細(xì)胞松弛

小鼠角質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)2015/08/05

實驗試劑HBSS：NaCl8g/LKCl400mg/LKH2PO460mg/L無水Na2PO447.86mg/L無水葡萄糖1000mg/LNaHCO3350mg/L實驗材料妊娠期BALB/c小鼠實驗步驟1.將1~2天齡新生裸鼠窒息后，置于培養(yǎng)皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗凈裸鼠，流水*沖洗，然后用70%乙醇洗兩次。小鼠應(yīng)立即使用，若待處理的小鼠數(shù)量較多，可置冰上30min。2.去除小鼠的四肢和尾巴。3.將小鼠從尾巴至鼻子的皮膚作一簡單切口，用大鼠牙齒鑷輕輕將整個身體的皮膚剝下，用一把鑷子夾住身

質(zhì)粒DNA的大量提取、純化及棉花的遺傳轉(zhuǎn)化2015/08/05

實驗試劑1.STE[0.1mol/LNaCI、10mmol/LTris-HCl(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)]2.溶液I[50mmol/L蔗糖、25mmol/LTris-HCl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0)]3.溶液II(0.4mol/LNaOH和2%SDS等量混勻)4.溶液III(3mol/LKac,pH4.8)5.異丙醇6.4mol/LLiCI7.RNase8.苯酚、酚-氯仿、氯仿9.乙醇實驗設(shè)備1.搖床2.制冰機3.高速離心機4.水浴鍋5.超凈

麻醉大鼠動脈血壓的測定（直接測定法）2015/07/23

實驗試劑1.20%氨基甲酸乙酯（Urethane）注射液或者1.5%戊巴比妥鈉（PhentobarbitalSodium）注射液2.1%普魯卡因注射液3.0.3%肝素生理鹽水注射液實驗設(shè)備1.常用實驗器械一套2.家兔或者大鼠實驗臺一個3.用于家兔或者大鼠的聚乙烯醫(yī)用塑料導(dǎo)管（家兔用導(dǎo)管外徑為2mm，內(nèi)徑為1.5mm；大鼠用導(dǎo)管外徑為1mm，內(nèi)徑為0.8mm）4.壓力換能器及其多通道生理信號采集記錄儀器實驗材料家兔，體重為2kg左右；大鼠，體重為200～250g左右。實驗步驟1.頸總動脈測量動脈血

細(xì)胞傷口愈合實驗2015/07/23

實驗試劑DMEM培養(yǎng)基胎牛血清PBSBD24孔細(xì)胞培養(yǎng)板Raininpipettips,1ml戊二醛乙醇結(jié)晶紫實驗設(shè)備細(xì)胞培養(yǎng)儀：37°Cand5%CO2實驗材料人MDA-MB-231cell實驗步驟1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長。2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長24小時后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑

細(xì)胞計數(shù)與存活測試2015/07/23

實驗材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計數(shù)盤及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計數(shù)器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計數(shù)器(Coultercounter,CoulterE

冷凍組織切片的制作2015/07/08

實驗試劑液氮，干冰，1％明膠，4％多聚甲醛，PBS，含1％NP-40的PBS，3％BSA／PBS稀釋抗體，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，DAB／金屬鹽試劑，3％過氧化氫，0.3％(W／V)氯化鎳貯存液，Harris蘇木精，乙醇實驗設(shè)備載玻片，Whatman1＃濾紙，低倍光學(xué)顯微鏡實驗材料未受損傷的組織實驗步驟1.將未受損傷的組織切剖成小樣本，約lcmXIcmX0.4cm。2.將標(biāo)本放在卡片的一端。標(biāo)記該卡片，將帶有標(biāo)本的一端浸入液氮中。60s后，取出標(biāo)本并放在干冰上。修剪卡片，使其大小剛好比組織塊稍

麻醉家兔、大鼠中心靜脈壓的測定2015/07/08

實驗原理中心靜脈壓（centralvenouspressureCVP）是用來反映右心房內(nèi)壓力變化的一個指標(biāo)。右心房內(nèi)壓力的變化受到兩個因素的影響：*是上下腔靜脈回流的情況，比如大量失血或者丟失體液而發(fā)生低血容量性休克時，回心血量明顯減少，右心房內(nèi)壓力會降低，中心靜脈壓降低；第二是右心室內(nèi)壓力變化的情況，比如肺動脈高壓時，右心室內(nèi)壓也增高，右心房內(nèi)血液進(jìn)入右心室受阻，右心房內(nèi)壓增高，中心靜脈壓增高。實驗試劑1.20%氨基甲酸乙酯注射液或者1.5%戊巴比妥鈉注射液2.1%普魯卡因注射液3.0.3%肝

干擾素的制備及檢測實驗2015/07/08

實驗原理干抗素是干擾素誘生劑作用于有關(guān)生物細(xì)胞所產(chǎn)生的一類高活性、多功能蛋白質(zhì)。它從細(xì)胞產(chǎn)生和釋放出來以后，又作用于相應(yīng)的其它同種細(xì)胞，使其獲得抗病毒及抗腫瘤等多方面的免疫力。所謂干擾素誘生劑，是指能誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的一類物質(zhì)。能誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞產(chǎn)生α和β干擾素者稱甲類干擾素誘生劑，如各種動物病毒、細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物等；可誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素的稱為乙類干擾素誘生劑，如脂多糖、鏈球菌毒素、腸毒素A等。在實際工作中，制備干擾素多采用兩種方法。一是用干擾素誘生劑誘導(dǎo)某些生物細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，

煙草轉(zhuǎn)化實驗流程2015/07/08

實驗材料煙草細(xì)胞：BY-2實驗步驟1.BY-2細(xì)胞培養(yǎng)BY-2細(xì)胞懸浮培養(yǎng)在搖床上，避光，溫度260C，轉(zhuǎn)速130rpm，每7天將1ml細(xì)胞轉(zhuǎn)入20ml新鮮的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。BY-2愈傷組織生長在固體培養(yǎng)基上，每3-4周繼代一次。轉(zhuǎn)基因的懸浮細(xì)胞和愈傷組織生長在含相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基中。2.用干轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌GV3101的準(zhǔn)備(1)接種農(nóng)桿菌單菌落到2ml新鮮的YEB液體培養(yǎng)基中，28“培養(yǎng)過;(2)取200ul培養(yǎng)物加到l0ml新的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)3-4小時:(3)'5000rpm,離心5m

單克隆抗體的克隆化方法2015/07/08

實驗原理經(jīng)過抗體測定的陽性孔，可以擴(kuò)大培養(yǎng)，進(jìn)行克隆，以得到單個細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體?？寺〉臅r間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細(xì)胞同時旺盛生長，互相爭奪營養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過一段時期培養(yǎng)之后，也還會因為細(xì)胞突變或特定染色體的丟失，使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)?？寺』螖?shù)的多少由分泌能力強弱和抗原的免疫性強弱而決定。一般說，免疫性強的抗原克

柱離心法純化質(zhì)粒DNA2015/06/25

實驗原理1.離心柱結(jié)構(gòu)：特殊硅基質(zhì)吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質(zhì)穿過。在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對有序排列，形成了疏水環(huán)境。在此環(huán)境中，核酸與硅膠膜能有效結(jié)合，而蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他污染物則不能結(jié)合。2.堿變性抽提的原理是在pH高于12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，破壞了堿基配對，導(dǎo)致雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性，但閉環(huán)的質(zhì)粒DNA鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開。當(dāng)pH調(diào)至中性時，

轉(zhuǎn)化克隆的篩選和鑒定2015/06/25

實驗原理利用轉(zhuǎn)化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質(zhì)粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質(zhì)粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。實驗試劑1.LB培養(yǎng)基(加抗菌素)2.PCR用試劑3.引物4.質(zhì)粒提取用試劑5.酶切需要的限制性內(nèi)切酶及其緩沖液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/LMgSO4，0.025mol/LTris-HClpH8.0)。6.100mg/ml氨芐青霉素實驗設(shè)備1.旋渦混合器2.小鑷子3.微量移液取樣器4.移液器吸頭5.1.5ml微量離心管6.雙面微量離心管架7.干式恒溫氣浴

免疫組織化學(xué)染色方法2015/06/25

實驗原理免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)?？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細(xì)胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法（immunofluorescenttechnique），常用的螢光素有異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothioc

小鼠胸腺細(xì)胞增殖3H-TdR摻入法檢測IL-1的生物活性2015/06/25

實驗試劑1.75%酒精2.5%FCS-RPMI-1640*培養(yǎng)液與RPMI-1640*培養(yǎng)液3.ConA或PHA4.IL-1標(biāo)準(zhǔn)品：倍比稀釋成至少6個不同濃度值。實驗設(shè)備1.3H-TdR、β-液閃汁數(shù)儀，微量細(xì)胞收集儀2.解剖刀、剪、單皿、研磨工具(玻璃勻漿器，不誘鋼網(wǎng)或者毛玻璃片，用于研磨小鼠胸腺)3.96孔細(xì)胞培養(yǎng)板4.刻度吸管，毛細(xì)吸管，刻度離心管、離心機、細(xì)胞計數(shù)板，倒置顯微鏡，加樣器(頭)，50%CO2培養(yǎng)箱，超凈工作臺實驗材料1.小鼠：BALB/C或C57BL/6小鼠，6-10周齡，

大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽囊收縮素（CCK）含量的測定2015/06/25

實驗試劑1.大鼠膽囊收縮素(CCK)定量檢測試劑盒(ELISA)2.蒸餾水實驗設(shè)備1.37℃恒溫箱2.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀3.精密移液器及一次性吸頭4.一次性試管5.吸水紙實驗步驟1.準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。2.配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3.加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋

抗原的制備方法2015/06/08

實驗步驟一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細(xì)致的工作，要制備一個高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學(xué)、化學(xué)和生理學(xué)等許多領(lǐng)域的知識。根據(jù)物理或化學(xué)特性建立起來的分離、純化方法的主要原理不外乎科二個方面：①利用混合物中幾個組分分配率的差別將他們分配到可用機械方法分離的兩或幾個物相中，如鹽析、有機溶劑抽提、層析和結(jié)晶等；②把混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于不同的區(qū)域而達(dá)到分離的目的，如電泳、超速離心和超濾等。由于組織細(xì)胞內(nèi)存著許多分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)