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免疫組化抗原修復注意事項2021/12/07

經甲醛固定的部分組織細胞，因固定過程中可能會形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇，使免疫組化標記敏感性明顯降低，因此在染色前，有些抗原需進行修復或暴露。抗原修復方法可分為化學方法和物理方法。化學方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制濃度與消化時間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時，浸泡切片的緩沖液的離子強度和pH、加熱的溫度和時間均影響著抗原修復效果。1、pH的應用范圍及選擇抗原修復液的pH非常重要，有效的抗原修復pH要比修復液的化學成分更重要，同

免疫組化實驗常見問題處理2021/12/07

當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統(tǒng)地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標本無染色①確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。③對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配，這一點是非常重要的。比如，如果一抗是兔來源的抗體，二抗一定要用抗兔的二抗來匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。④檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。⑤檢查

質控樣是啥意思？質控樣/同標樣又有何區(qū)別？2021/12/06

質控樣是什么意思?質控樣，一般是實驗室用來檢驗曲線做的是否標準用的，他是一個已知濃度的樣品且濃度有正負誤差，比如砷質控樣濃度為3.240±0.012毫克/升。你將他帶入你的曲線進行分析，看得出的數據是否在質控樣濃度誤差范圍內，如果在范圍內，則可以說明你的曲線沒有問題，相應的其他數據也正確。質控樣在檢測活動中的重要性檢測過程中涉及到很多流程或者叫做步驟吧，或多多少會遇到一些不確定的因素，最終影響著我們的檢測結果的準確性，那么如何確保我們的檢測是在可控范圍內，換句話說，如何保證我們的檢測結果的有效性

血清匯總：那些可以忽略卻重要的細節(jié)2021/12/06

在我們日常的細胞實驗中，總會遇到各式各樣的問題，其中關于胎牛血清（FBS）的問題最多，今天為大家匯總了血清一些常見問題，滿滿的干貨！那些可以忽略的小卻重要的細節(jié)：1.血清的保存溫度？未拆封的血清應保存在-15℃至-20℃，避免反復凍融。拆封后的血清應無菌分裝成適當的用量并存放于-15℃至-20℃，2~8℃溶解后建議一個月內使用。2.血清的有效期是多久？大部分血清效期是5年，針對每個批次，請通過質檢文件確定具體效期日期。3.血清應如何融解？血清從冷凍箱取出后，置于2～8℃冰箱使之融解，不時規(guī)則地搖

這六種菌種保存方法快收藏起來！2021/12/06

一、傳代保存法：有些微生物當遇到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進行菌種轉接、培養(yǎng)后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產菌種的保存。傳代保存時，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進

細胞培養(yǎng)時生長緩慢？遠慕幫您解決！2021/12/06

細胞生長緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細胞生長所需的某種因子。通常情況下，當小伙伴購買細胞，并沒有按照ATCC或國內細胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。(B)細菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細胞，可以丟棄污染細胞。當然，丟棄并不是隨意的，扔進垃圾桶。應按照實驗室生物安全規(guī)定進行。然后復蘇培

KO細胞中目的蛋白殘留問題及解決方案2021/12/03

在我們鑒定基因敲除（KO）細胞是否建立成功時，除了基因水平的測序、PCR等方法外，蛋白水平的WesternBlot驗證也是一個重要的方法。特別是對于文章發(fā)表中結果的呈現，WesternBlot圖尤為重要。但在實際實驗的過程中，偶爾也會出現測序鑒定為KO純合子但WB實驗卻有條帶的情況，即蛋白殘留。那么基因敲除細胞時蛋白殘留是如何產生的呢？1由于目的基因的多轉錄本引起的蛋白殘留基因一般含有多個不同的轉錄本，在選擇敲除位點時，有時會很難保證覆蓋所有的轉錄本，而未被影響到的轉錄本就有可能正常轉錄翻譯從而

動物實驗中的安全防護，實驗人注意！2021/12/03

動物實驗中的安全防護主要指在實驗過程中可能對實驗人員造成的危害和對公共環(huán)境造成的污染各種不安全因素進行的防護。這些不安全因素主要來自化學、物理和生物等方向。動物實驗中的安全防護包括防火、防毒、防爆、防觸電、防輻射、防外傷等，還包括防動物咬傷、防動物傳染，特別要防來自動物的氣溶膠吸入感染。為保護工作人員、實驗者及其周圍的人群安全，可采取八點有效措施：（1）建立強有力的安全防護組織（2）制定嚴密的安全制度（3）抓好深入的安全教育（4）進行認真的醫(yī)學檢測（5）推廣安全的操作技術（6）提供良好的防護設備

微生物研究：這些菌株的區(qū)別你還沒搞懂？2021/12/03

標準菌株亦稱模式菌株，在給某細菌定名，分類作記載和發(fā)表時，為了使定名準確和作為分類概念的準則，以純粹活菌（可繁殖）狀態(tài)所保存的菌種。相當于動植物分類中的模式標本。在進行細菌等的分類和鑒定時，生理學和生物化學特性十分重要，但若就這些性質進行試驗，就必須應用許多純分離的新細胞。因此，作為分類標準的菌種，也有必要進行純粹分離，并以活菌（可以分裂）狀態(tài)保存。在標準菌種中，對于從作過原始記載的作者實際分離或應用的菌株，通過營養(yǎng)繁殖獲得和保存的菌株，稱為正標準菌株。此外，當原作者使用復數菌株，以后的研究者選

微生物染色方法介紹2021/12/03

天然色素具有安全無毒性、無致癌性和可生物降解等特點，隨著各國對綠色環(huán)保產品的追求，天然色素在市場上的需求逐年增加，單單依靠動植物中的提取已經不能滿足人類的需求。而微生物的分布廣，種類繁多，因此，微生物染色在紡織領域具有廣闊的應用前景。1、微生物色素微生物色素是微生物的一種次級代謝產物，色素顏色種類較多，有紅、橙、黃、綠、青、紫、黑、棕等各種顏色。微生物色素可以分為水溶性和非水溶性色素兩種。與其他天然染料相比，微生物色素的生產周期短，成本低廉，更易于工業(yè)化生產。微生物色素的產生方式主要有兩種，一種

蛋白、DNA、RNA的上樣緩沖液區(qū)別2021/12/02

上樣緩沖液即loadingbuffer，是蛋白質、核酸DNA與RNA的研究實驗中溶解和添加樣品時所用的一類上樣緩沖液，蛋白質、DNA、RNA是不同的樣品，其上樣緩沖液也有所區(qū)別。蛋白上樣緩沖液的組成其緩沖液主要采用Tris-HCl（三羥甲基氨基甲烷鹽酸）或Tris甘氨酸、與EDTA鹽（乙二胺四乙酸二鈉），還需添加SDS，DTT（二硫蘇糖醇），溴酚藍，甘油等。蛋白、DNA、RNA的上樣緩沖液區(qū)別SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時蛋白質本身的電荷*被SDS掩蓋，消除了

常用指示劑的配制方法(超全)2021/12/02

二苯胺磺酸鈉指示液取二苯胺磺酸鈉0.2g，加水100ml使溶解，即得。二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。雙硫腙指示液取雙硫腙50mg，加乙醇100ml使溶解，即得。石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40ml，回流煮沸1小時,靜置，傾去上層清液，再用同一方法處理二次，每次用乙醇30ml，殘渣用水10ml洗滌，傾去洗液，再加水50ml，煮沸，放冷，濾過，即得。變色范圍pH4.5~8.0(紅→藍)。甲酚紅指示液取甲酚紅0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液5.3ml使溶解

你的實驗室做常規(guī)支原體檢測了嗎2021/12/02

全球平均有約15~35%細胞實驗室發(fā)生支原體污染（65~80%嚴重污染），超過一半實驗室有兩種支原體污染；而全球各地的細胞庫中，也有發(fā)現5~35%不等的支原體感染率，日本甚至高達60%。但！全球目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細胞實驗室卻不到50%！支原體為細菌的一類，最早在1898年由法國E.Nocard及E.R.Roux從肺疫牛只中分離出來，1956年才正式命名為支原體(Mycoplasma)；支原體大小介于細菌與病毒之間(直徑介于0.15-0.3?m)，為目前發(fā)現最小最jian單的原核微生物，唯

實驗室各種化學試劑開瓶后的有效期介紹2021/12/02

按照中華人民共和國GB15346-94化學試劑包裝標準規(guī)定：第9.1.1.M規(guī)定：要求注明有效期的必須注明有效期;生產日期或生產批號。我國化學試劑的分類：優(yōu)級純(GR，綠標簽)：主成分含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準物質。分析純(AR，紅標簽)：主成分含量很高、純度較高，干擾雜質很低，適用于工業(yè)分析及化學實驗?；瘜W純(CP，藍標簽)：主成分含量高、純度較高，存在干擾雜質，適用于化學實驗和合成制備。實驗純(LR，黃標簽)：主成分含量高，純度較差，雜質含量不做選擇，只適用

蛋白質相互作用(protein interaction)實驗方法2021/12/01

免疫共沉淀和親和層析共分離：免疫共沉淀是證明蛋白質-蛋白質相互作用的直接經典和有效的方法，如蛋白A能與B相互作用結合成異源二聚體，無論用抗A或抗B的抗體或與A或B的親和物偶聯(lián)的agarose小珠都能把A和B沉淀下來。因此廣泛用于蛋白質相互作用研究。常用的小珠：GST-Agarose（不需要抗體）ProteinA-Agarose(用時需加抗體)基本方法：1.表達蛋白質A2.蛋白質A與親和小珠結合3.用結合有蛋白質A的親和小珠調取細胞破碎液中蛋白質B4.離心、洗滌親和小珠若干次5.處理親和小珠使蛋白

檢驗檢測實驗室常見的幾種風險，趕緊規(guī)避！2021/12/01

超能力范圍檢驗在實際工作過程中，個別檢驗檢測機構超能力范圍檢測情況時有發(fā)生。超范圍檢驗主要有三種形式：1．故意超能力范圍檢驗實驗室或實驗室中個別人員為滿足客戶要求，為實驗室爭取經濟利益，對不在能力范圍內的產品開展檢驗工作，出具帶標識的檢驗報告；或實驗室人員以為采用標準中的個別標準在能力范圍內，誤將產品進行檢驗并出具帶標識的檢驗報告。實驗室應將超能力范圍檢測的后果向每一位員工宣傳，不能為經濟利益或所謂的為單位著想而故意超能力范圍檢測；同時實驗室還應認真梳理實驗室的能力范圍，對確實有設備、具備檢驗能

檢驗和檢測，有多少人還在混用?2021/12/01

CMA《檢驗檢測機構資質認定評審準則》中所說的“檢驗檢測機構”是指一個機構?還是指“檢驗機構”和“檢測機構”兩個機構?我們來看“檢驗檢測機構”的定義：《檢驗檢測機構資質認定評審準則》的條款3.2的定義是：依法成立，依據相關標準或者技術規(guī)范，利用儀器設備、環(huán)境設施等技術條件和專業(yè)技能，對產品或者法律法規(guī)規(guī)定的特定對象進行檢驗檢測的專業(yè)技術組織。這個定義其實并沒有給出“檢驗檢測機構”中“檢驗”和“檢測”的區(qū)別。我們再看另外一份文件認監(jiān)委頒發(fā)的一份文件：《檢驗檢測機構資質認定評審準則》及釋義在對條款3

電泳的基本原理及影響顆粒電泳速度的因素2021/12/01

一、基本原理不同帶電顆粒，因其所帶電荷的性質和多少、形狀和大小等差異，使其在同一電場強度、相同的支持介質和緩沖液的條件下，各自的泳動速度不同，從而使各種不同的帶電顆粒如蛋白質、核酸等生物大分子得以分離。帶電顆粒在電場中泳動速度以遷移率(mobility)表示。故遷移率可定義為帶電顆粒在單位電場強度下的泳動速度，是指在1V／m的電場作用下，帶電顆粒每秒鐘移動的距離(m)，其移動速率為m／s，遷移率以m2／(V·s)表示。而在實際應用中以cm2／(V·s)表示，因此通過測量d、l、V、t，便可計算遷

瓊脂糖珠PK磁珠，別在分不清啦2021/11/30

免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。它采用固定在微珠支持物上的特定抗體，從復雜的混合物中，純化單一抗原的實驗。早期做科研的老師們，一般都會選用瓊脂糖珠(也稱瓊脂糖樹脂)作為免疫沉淀實驗中的固相支持物的材料。隨著實驗技術的更迭，磁珠已經后lai居上，在免疫沉淀和其他微量親和純化方法中占據重要位置。那么，瓊脂糖珠和磁珠各有什么優(yōu)勢？具體實驗中又該如何選擇呢？今天就帶大家探究一下吧！瓊脂糖珠瓊脂糖珠，結構呈海綿狀，直徑50-150μm

血清產生沉淀該如何避免？2021/11/30

怎么樣才能避免血清中產生沉淀呢？首先我們需要了解下什么是血清以及血清的主要作用指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋原白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞的起到某些保護作用。主要作用1.提供基本營養(yǎng)物質：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質。2.提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質激素（地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮