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成都正民德思生物科技有限公司
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Cube Biotech瓊脂糖基質(zhì)的選擇2022/07/28
瓊脂糖由瓊脂二糖的重復(fù)單元組成,瓊脂糖珠通常是交聯(lián)多孔的,因此蛋白質(zhì)可以流過珠子的孔隙。瓊脂糖珠??捎糜诜肿优抛杌蛴H和層析,對(duì)于親和層析,配體(如NTA或IDA)與瓊脂糖珠聚合物共價(jià)連接,可以將帶標(biāo)簽的蛋白與其他蛋白分離。瓊脂糖基質(zhì)用于蛋白質(zhì)的純化已有幾十年的歷史,市售的基于瓊脂糖的基質(zhì)種類繁多,不同基質(zhì)之間的物理性質(zhì)可能大不相同,我們這篇簡(jiǎn)短的總結(jié)將幫助您找到*佳的產(chǎn)品。Superflow,Sepharose,Agarose的區(qū)別AgarosePureCube瓊脂糖交聯(lián)度高且在高壓下穩(wěn)定,可與
冷凍電鏡結(jié)合Nanodisc在膜蛋白研究的應(yīng)用2022/07/28
細(xì)胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白,其參與和行使了眾多細(xì)胞功能,包括細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞、能量交換等。膜蛋白擔(dān)任了各種神經(jīng)信號(hào)分子、激素和其他底物的受體,構(gòu)成了各種離子跨膜的通道,以及構(gòu)成各類轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。在人體蛋白中,有大約30%是膜蛋白。FDA批準(zhǔn)的新藥中,大多數(shù)都以膜蛋白為靶點(diǎn)。隨著對(duì)膜蛋白工作機(jī)理的深入研究,新的細(xì)胞調(diào)控作用靶點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn),從而使作用于靶點(diǎn)的新藥能更有針對(duì)性地被開發(fā)出。例如現(xiàn)在市面上有不少基于細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白設(shè)計(jì)的藥物,常見的一類抗高血壓藥(如氨氯地平),其主要功能是
如何利用GST標(biāo)簽蛋白純化蛋白(下)2022/07/28
如何在質(zhì)粒中添加/克隆GST標(biāo)簽將GST標(biāo)簽添加到目標(biāo)蛋白的優(yōu)先方法是使用pGEX系列載體,它們有不同的蛋白質(zhì)裂解位點(diǎn),而這對(duì)于后續(xù)提到的去除GST標(biāo)記方法尤其重要。圖4描述了我們推薦克隆方法的過程和步驟。(1)pGEX載體都有一個(gè)包含多個(gè)限制性酶切位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)(MSC),這些位點(diǎn)因pGEX載體而異。如表2所述。此外,所有的pGEX載體均含有三個(gè)終止密碼子,覆蓋了MSC之后DNA菌株上所有的三個(gè)可能的閱讀框,以確保所表達(dá)的蛋白質(zhì)本身并不包含終止密碼子。圖4:在目標(biāo)蛋白質(zhì)上添加GST標(biāo)簽的克隆
PureCube磁珠使用指南2022/07/28
磁珠蛋白純化操作指南磁珠的使用采用圖1中的6個(gè)簡(jiǎn)易步驟,即可實(shí)現(xiàn)蛋白的純化。圖1:使用磁珠/MagBeads純化蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)流程。步驟1:通常采用磁珠純化的蛋白來(lái)源于細(xì)胞裂解物,此時(shí)目的蛋白與細(xì)胞表達(dá)的其他蛋白混合在一起。第2步:向細(xì)胞裂解物中加入適量的磁珠。此步建議使用無(wú)菌移液器吸頭。第3步:孵育磁珠-蛋白質(zhì)混合物。孵育時(shí)建議采用較慢但穩(wěn)定的速度(不能渦旋),室溫下持續(xù)約2小時(shí)即可。圖1中采用的是微型離心管,但也可以使用無(wú)菌的falcon管。第4步:孵育完成后,所有的目的蛋白質(zhì)都應(yīng)該結(jié)合到磁珠
NTA vs. IDA:NTA和IDA的區(qū)別和選擇2022/07/28
如果您正在使用固定化金屬親和層析(IMAC)純化蛋白,您使用的金屬離子很可能是通過次氮基三乙酸(NTA)或者亞氨基二乙酸(IDA)偶聯(lián)到樹脂基質(zhì)上的。在眾多可用于IMAC的螯合配體中,NTA和IDA是常用的兩種。您更傾向于使用哪種螯合配體?您為何選擇該配體?這兩種配體有什么不同?為了幫助我們的客戶在充分了解產(chǎn)品的情況下做出訂購(gòu)決定,我們以PureCubeNi-NTA瓊脂糖和PureCubeNi-IDA瓊脂糖為例,詳細(xì)介紹二者的異同。兩種配體在結(jié)構(gòu)上和化學(xué)上有何不同?螯合配體如何影響蛋白結(jié)合載量?
膜蛋白研究利器-納米磷脂盤2022/07/28
膜蛋白在細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)、信息、能量交換中具有重要的作用和意義,因此膜蛋白成為了當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一。但是由于膜蛋白存在疏水部分,因此在體外容易聚合,所以需要找到一種合適的方法讓膜蛋白能夠穩(wěn)定地存在于細(xì)胞外的環(huán)境。傳統(tǒng)的膜蛋白提取方法是利用去污劑來(lái)提取,但是經(jīng)過去污劑提取后的膜蛋白其構(gòu)象和生物學(xué)活性都較易因?yàn)楦鞣N問題被破壞,作為“鑲嵌”在細(xì)胞膜磷脂雙分子層中的蛋白,一旦脫離了其穩(wěn)定的天然膜環(huán)境,便會(huì)影響甚至失去其生理功能,即使膜蛋白被成功地提取出來(lái),也達(dá)不到好研究結(jié)果。早在上個(gè)世紀(jì)90年代,來(lái)自U
為什么在生產(chǎn)時(shí)磁珠損耗會(huì)增加?2022/07/28
擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模時(shí),與小批量生產(chǎn)相比,生產(chǎn)磁珠的問題之一是大批量生產(chǎn)可能會(huì)導(dǎo)致更大且不成比例的磁珠損耗,即使磁珠的生產(chǎn)條件與小批量的生產(chǎn)過程相似,似乎也會(huì)發(fā)生這種情況。通常情況下,當(dāng)放大生產(chǎn)工藝的規(guī)模,會(huì)有更高的生產(chǎn)效率,但當(dāng)使用傳統(tǒng)的磁性分離器放大磁珠生產(chǎn)規(guī)模時(shí),實(shí)際情況卻并非如此。到底是怎么回事?當(dāng)使用傳統(tǒng)(非均勻)分離裝置時(shí),磁場(chǎng)會(huì)隨著與磁體距離的增大而減小。磁力與磁場(chǎng)變化有關(guān),因此也會(huì)隨著與磁體距離的增加而減小。當(dāng)放大磁珠處理的規(guī)模時(shí),與磁鐵距離會(huì)增加,但磁鐵的重量卻不能按比例增加以抵消這個(gè)
PureCube DIBMA–無(wú)去污劑法增溶膜蛋白2022/07/27
去垢劑(如SDS,n-辛基-β-d-葡萄糖苷(OG),n-十二烷-β-d-麥芽糖苷(DDM))被廣泛用于膜蛋白的提取,但不同去垢劑有著不同的缺點(diǎn),例如短鏈非離子型去垢劑會(huì)影響膜蛋白的功能特性。幾乎可以確定的是如果將天然的磷脂雙分子層從膜蛋白中移除,膜蛋白的功能會(huì)受到影響。目前可通過MSP-nanodiscs(膜結(jié)構(gòu)蛋白-納米磷脂盤)(圖一)或者無(wú)去污劑聚合物體系(圖二)(苯乙烯-馬來(lái)酸共聚物(SMAs)、二異丁烯-馬來(lái)酸(DIBMA))來(lái)模擬天然磷脂雙分子層。使用后者可直接從細(xì)胞中提取膜蛋白,而
Cube Biotech Rho1D4-專用于膜蛋白的抗體2022/07/27
Rho1D4是指牛視紫紅質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)C末端的最后9個(gè)氨基酸,它是由與該序列特異性結(jié)合的單克隆抗體而命名的。通過與Rho1D4抗體結(jié)合,此序列可作為一種高特異性的純化標(biāo)簽用于膜蛋白的純化。采用分子生物學(xué)方法將目的膜蛋白的C末端加上Rho1D4標(biāo)簽(圖1),具有該序列的目的蛋白可被載有rho1D4抗體的親和基質(zhì)特異性結(jié)合,隨后目的蛋白可通過添加過量的Rho1D4肽與基質(zhì)抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合被洗脫下來(lái),這種洗脫條件比改變pH更加溫和。圖1:具有3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的假設(shè)膜蛋白,將序列為TETSQVAPA的Rho-1
“化學(xué)發(fā)光生產(chǎn)環(huán)節(jié)的重點(diǎn)要素”2022/07/26
1、穩(wěn)定的可重復(fù)性分離條件?體外診斷(IVD)和其它一些的生物科技企業(yè),在每一次磁珠功能化生產(chǎn)的過程以及在后續(xù)的分裝環(huán)節(jié)中,都會(huì)期望能獲得穩(wěn)定的可重復(fù)性??墒?,運(yùn)用傳統(tǒng)的磁性分離設(shè)備時(shí),并非所有磁珠會(huì)處于相似的分離狀態(tài),例如:一些磁珠*受到磁力的作用;而一些磁珠會(huì)因遠(yuǎn)離磁鐵僅受到微弱的磁力作用;或一些磁珠相對(duì)靠近磁鐵而受到過強(qiáng)的磁力,可導(dǎo)致磁珠和鏈接在其上的生物分子存在被破壞的風(fēng)險(xiǎn)(如下圖所示)。圖1展現(xiàn)對(duì)比了磁珠在傳統(tǒng)磁鐵(灰色)作用下,由于位置不同,受到的磁力不均勻;在SEPMAG®生物磁性
建立膜蛋白文庫(kù)的有效方法2022/07/26
細(xì)胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白,其承擔(dān)了大多數(shù)生物膜的功能,包括細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞、能量交換等發(fā)揮著重要作用。在人體蛋白中,有大約30%是膜蛋白,F(xiàn)DA批準(zhǔn)的新藥中,大多數(shù)都以膜蛋白為靶點(diǎn)。隨著對(duì)膜蛋白生物作用機(jī)理的深入研究,新的細(xì)胞調(diào)控作用靶點(diǎn)被不斷發(fā)現(xiàn),從而使選擇性作用于靶點(diǎn)的新藥能更有針對(duì)性的開發(fā)。例如現(xiàn)在市面上有不少基于細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白設(shè)計(jì)的藥物,最常見一類抗高血壓藥,其主要功能是作為鈣離子通道阻滯劑,選擇性地同鈣離子通道結(jié)合以阻滯鈣離子進(jìn)入細(xì)胞,從而導(dǎo)致心肌收縮力減弱、心
Cube Biotech新型蛋白純化DTT和EDTA高耐受產(chǎn)品2022/07/26
組氨酸標(biāo)簽是應(yīng)用最為廣泛的蛋白純化標(biāo)簽。其優(yōu)點(diǎn)包括標(biāo)簽尺寸小、低免疫原性、在蛋白自然和變形狀態(tài)下都保持有效性,在去污劑以及多種添加劑成分環(huán)境下均保持有效等多方面優(yōu)勢(shì)。為了進(jìn)一步提高純化體系在純化過程中的穩(wěn)定性,德國(guó)CubeBiotech生物公司現(xiàn)新推出了新型PureCube100INDIGONi-Agarose系列產(chǎn)品。這款新型的填料是以高交聯(lián)度且平均直徑為100µm的瓊脂糖為基材,其可用于更高流速要求的重力柱純化和FPLC方面應(yīng)用。PureCube100INDIGONi-Agarose系列采用
Nanodisc配合冷凍電鏡提升膜蛋白的分辨率2022/07/26
Toxic,hot,andspicy:Nanodiscsimprovemembraneproteinresolutionincryo-EM(作者:CubeBiotech)Nanodisc結(jié)合冷凍電鏡應(yīng)用時(shí),Nanodisc提升了通過冷凍電鏡對(duì)膜蛋白的解析率,同時(shí)表現(xiàn)了功能性磷脂所扮演的重要角色。Thelastfewyearshaveseenatremendousincreaseinhigh-resolutionproteinstructuressolvedbycryoelectronmicros
Nanodisc 在 GPCR 抗體研發(fā)中的應(yīng)用2022/07/26
一、GPCR簡(jiǎn)介GPCR(Guanosine-bindingProteinCoupledReceptor)中文名稱為G蛋白偶聯(lián)受體,是一種膜蛋白受體。GPCR作為細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要蛋白,其共同點(diǎn)是其蛋白體結(jié)構(gòu)中都有七個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)。研究顯示GPCR參與了很多細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,當(dāng)膜外的配體作用于該受體時(shí),該受體的膜內(nèi)部分與G蛋白發(fā)生結(jié)合,從而激活G蛋白。G蛋白可通過兩種途徑傳遞細(xì)胞外的信息:第一種方式是打開跨膜離子通道,讓外界的離子進(jìn)入;第二種方式是激活第二信使,如:cAMp、IP3/DAG等。簡(jiǎn)單
無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)2022/07/26
選擇細(xì)胞裂解物對(duì)活細(xì)胞中重組蛋白表達(dá)是很有用的,它們可以裂解真核細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞,并去除蛋白質(zhì)中所有不需要表達(dá)的成分。這些裂解物可以與DNA模板和其他所需成分在試管中結(jié)合,進(jìn)行蛋白質(zhì)的表達(dá)(1)。Figure1:Cell-freeexpressioncomponentsandadditivesFigure2:Productionofatargetproteinwithlivingcells優(yōu)勢(shì)1.無(wú)細(xì)胞反應(yīng)很容易建立,僅需幾個(gè)小時(shí)就可以完成蛋白質(zhì)表達(dá)。這種方法可以用小規(guī)模(50-100微升)的反應(yīng)
如何利用GST標(biāo)簽蛋白純化蛋白(上)2022/07/26
圖1:GST標(biāo)簽的蛋白什么是GST標(biāo)簽?目前有多種用于蛋白純化的親和標(biāo)簽,而GST標(biāo)簽就是其中之一。GST是谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶的簡(jiǎn)稱,指的是整個(gè)蛋白質(zhì),而不是像Rho1D4標(biāo)簽僅指幾個(gè)氨基酸。自20世紀(jì)80年代末GST標(biāo)簽就開始用于蛋白質(zhì)純化(Smith&Johnson1988),并被確立為需要高純度的蛋白質(zhì)純化試驗(yàn)的可靠方法(Harper&Speicher2013)。GST標(biāo)簽的大小為26kDa,因此與其它蛋白質(zhì)親和標(biāo)簽相比確實(shí)很大。從理論上講,它可以與蛋白質(zhì)的C端或N端融合(Terpe200
膜蛋白研究利器(1)2022/07/26
膜蛋白研究利器:Rho1D4親和純化體系+Nanodiscs(納米磷脂盤)在人體蛋白中有大約30%是膜蛋白,膜蛋白在細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)、信息、能量交換中發(fā)揮著重要作用,膜蛋白也成為大多數(shù)重要的藥物研究對(duì)象和靶點(diǎn)。FDA批準(zhǔn)的新藥中就有大多數(shù)都以膜蛋白為靶點(diǎn),幾乎所有的膜蛋白都是研究熱點(diǎn)。然而讓人吃驚的是,樂觀估計(jì),目前已經(jīng)被透徹研究清楚結(jié)構(gòu)的膜蛋白僅占膜蛋白總量的1%。究其原因,是因?yàn)槟さ鞍滓栏交驒M跨在細(xì)胞膜的磷脂雙分子層上,使膜蛋白的表達(dá)、純化、結(jié)晶和結(jié)構(gòu)分析都有很大難度。市面上有一些專用于膜蛋白提
如何獲得純凈且活性的膜蛋白2022/07/26
Rho1D4tag/1D4tagRho1D4,也叫“1D4”,是一種親和標(biāo)記物,包含了九種氨基酸(T-E-T-S-Q-V-A-P-A)。該標(biāo)記物優(yōu)先與目標(biāo)蛋白的C端結(jié)合。瓊脂糖和磁珠與相對(duì)應(yīng)的Rho1D4-抗體能夠純化標(biāo)記了Rho1D4標(biāo)簽的蛋白。Rho1D4蛋白純化實(shí)驗(yàn)不僅擁有基于其它抗體為基礎(chǔ)的蛋白純化特別高的專一特異性,并且蛋白的產(chǎn)量也很高。關(guān)于Rho1D4的更多信息,我們撰寫了一本指南為您提供所有必須信息。產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)用途特異性結(jié)合和純化Rho1D4標(biāo)記的蛋白特異性具有與Rho1D4標(biāo)記
INDIGO - 新一代His標(biāo)簽純化產(chǎn)品線2022/07/26
His-tag標(biāo)簽的蛋白純化是迄今為止在生物學(xué)和生物化學(xué)中常用的技術(shù)之一。然而,這種技術(shù)并非沒有其局限性,常見的his-tag標(biāo)簽純化技術(shù),如Ni-NTA,與蛋白酶抑制劑或還原劑等緩沖液中常用的物質(zhì)不相容。我們研發(fā)的INDIGO配基取代了傳統(tǒng)的NTA或IDA配基。INDIGO產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)Figure1:His-tagproteinpurificationusingINDIGO-NiagarosebeadsINDIGO是什么?INDIGO是一種新開發(fā)的配基,可將二價(jià)金屬離子與瓊脂糖微球結(jié)合,類似于N
化學(xué)發(fā)光試劑盒生產(chǎn)過程中,避免磁珠不可逆的聚集問題2022/07/14
避免生產(chǎn)過程中不可逆的聚集問題批次間一致性是試劑盒水平可重復(fù)性的關(guān)鍵。但在非均質(zhì)系統(tǒng)中,不可逆的聚集是批次間變異性的主要來(lái)源之一。而如果所有磁珠都受到與均勻磁性系統(tǒng)相同的力,則聚集的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)大大降低。傳統(tǒng)的磁性分離器所產(chǎn)生的磁場(chǎng)始終會(huì)由于磁力隨距離的變化而變化。因此,遠(yuǎn)離留滯區(qū)域的磁珠受到的力很小,并且需要更長(zhǎng)時(shí)間受到力的作用才能分離。在分離的過程中,在留滯區(qū)域附近的磁珠會(huì)長(zhǎng)時(shí)間承受較大的力。長(zhǎng)時(shí)間暴露于高強(qiáng)度磁場(chǎng)下會(huì)升高不可逆的磁珠聚集風(fēng)險(xiǎn),這便會(huì)導(dǎo)致大量批次間不一致。在大批量生產(chǎn)中,技術(shù)人員和
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