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Cube Biotech瓊脂糖基質(zhì)的選擇2022/07/28

瓊脂糖由瓊脂二糖的重復(fù)單元組成，瓊脂糖珠通常是交聯(lián)多孔的，因此蛋白質(zhì)可以流過珠子的孔隙。瓊脂糖珠?？捎糜诜肿优抛杌蛴H和層析，對于親和層析，配體（如NTA或IDA）與瓊脂糖珠聚合物共價連接，可以將帶標簽的蛋白與其他蛋白分離。瓊脂糖基質(zhì)用于蛋白質(zhì)的純化已有幾十年的歷史，市售的基于瓊脂糖的基質(zhì)種類繁多，不同基質(zhì)之間的物理性質(zhì)可能大不相同，我們這篇簡短的總結(jié)將幫助您找到*佳的產(chǎn)品。Superflow，Sepharose，Agarose的區(qū)別AgarosePureCube瓊脂糖交聯(lián)度高且在高壓下穩(wěn)定，可與

冷凍電鏡結(jié)合Nanodisc在膜蛋白研究的應(yīng)用2022/07/28

細胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白，其參與和行使了眾多細胞功能，包括細胞與外界進行物質(zhì)運輸、信息傳遞、能量交換等。膜蛋白擔(dān)任了各種神經(jīng)信號分子、激素和其他底物的受體，構(gòu)成了各種離子跨膜的通道，以及構(gòu)成各類轉(zhuǎn)運蛋白。在人體蛋白中，有大約30%是膜蛋白。FDA批準的新藥中，大多數(shù)都以膜蛋白為靶點。隨著對膜蛋白工作機理的深入研究，新的細胞調(diào)控作用靶點不斷被發(fā)現(xiàn)，從而使作用于靶點的新藥能更有針對性地被開發(fā)出。例如現(xiàn)在市面上有不少基于細胞轉(zhuǎn)運通道蛋白設(shè)計的藥物，常見的一類抗高血壓藥（如氨氯地平），其主要功能是

如何利用GST標簽蛋白純化蛋白（下）2022/07/28

如何在質(zhì)粒中添加/克隆GST標簽將GST標簽添加到目標蛋白的優(yōu)先方法是使用pGEX系列載體，它們有不同的蛋白質(zhì)裂解位點，而這對于后續(xù)提到的去除GST標記方法尤其重要。圖4描述了我們推薦克隆方法的過程和步驟。（1）pGEX載體都有一個包含多個限制性酶切位點的多克隆位點（MSC），這些位點因pGEX載體而異。如表2所述。此外，所有的pGEX載體均含有三個終止密碼子，覆蓋了MSC之后DNA菌株上所有的三個可能的閱讀框，以確保所表達的蛋白質(zhì)本身并不包含終止密碼子。圖4：在目標蛋白質(zhì)上添加GST標簽的克隆

PureCube磁珠使用指南2022/07/28

磁珠蛋白純化操作指南磁珠的使用采用圖1中的6個簡易步驟，即可實現(xiàn)蛋白的純化。圖1：使用磁珠/MagBeads純化蛋白質(zhì)的標準流程。步驟1：通常采用磁珠純化的蛋白來源于細胞裂解物，此時目的蛋白與細胞表達的其他蛋白混合在一起。第2步：向細胞裂解物中加入適量的磁珠。此步建議使用無菌移液器吸頭。第3步：孵育磁珠-蛋白質(zhì)混合物。孵育時建議采用較慢但穩(wěn)定的速度（不能渦旋）,室溫下持續(xù)約2小時即可。圖1中采用的是微型離心管，但也可以使用無菌的falcon管。第4步：孵育完成后，所有的目的蛋白質(zhì)都應(yīng)該結(jié)合到磁珠

NTA vs. IDA：NTA和IDA的區(qū)別和選擇2022/07/28

如果您正在使用固定化金屬親和層析（IMAC）純化蛋白，您使用的金屬離子很可能是通過次氮基三乙酸（NTA）或者亞氨基二乙酸(IDA)偶聯(lián)到樹脂基質(zhì)上的。在眾多可用于IMAC的螯合配體中，NTA和IDA是常用的兩種。您更傾向于使用哪種螯合配體？您為何選擇該配體？這兩種配體有什么不同?為了幫助我們的客戶在充分了解產(chǎn)品的情況下做出訂購決定，我們以PureCubeNi-NTA瓊脂糖和PureCubeNi-IDA瓊脂糖為例，詳細介紹二者的異同。兩種配體在結(jié)構(gòu)上和化學(xué)上有何不同？螯合配體如何影響蛋白結(jié)合載量？

膜蛋白研究利器-納米磷脂盤2022/07/28

膜蛋白在細胞與外界進行物質(zhì)、信息、能量交換中具有重要的作用和意義，因此膜蛋白成為了當(dāng)前研究熱點之一。但是由于膜蛋白存在疏水部分，因此在體外容易聚合，所以需要找到一種合適的方法讓膜蛋白能夠穩(wěn)定地存在于細胞外的環(huán)境。傳統(tǒng)的膜蛋白提取方法是利用去污劑來提取，但是經(jīng)過去污劑提取后的膜蛋白其構(gòu)象和生物學(xué)活性都較易因為各種問題被破壞，作為“鑲嵌”在細胞膜磷脂雙分子層中的蛋白，一旦脫離了其穩(wěn)定的天然膜環(huán)境，便會影響甚至失去其生理功能，即使膜蛋白被成功地提取出來，也達不到好研究結(jié)果。早在上個世紀90年代，來自U

為什么在生產(chǎn)時磁珠損耗會增加？2022/07/28

擴大生產(chǎn)規(guī)模時，與小批量生產(chǎn)相比，生產(chǎn)磁珠的問題之一是大批量生產(chǎn)可能會導(dǎo)致更大且不成比例的磁珠損耗，即使磁珠的生產(chǎn)條件與小批量的生產(chǎn)過程相似，似乎也會發(fā)生這種情況。通常情況下，當(dāng)放大生產(chǎn)工藝的規(guī)模，會有更高的生產(chǎn)效率，但當(dāng)使用傳統(tǒng)的磁性分離器放大磁珠生產(chǎn)規(guī)模時，實際情況卻并非如此。到底是怎么回事？當(dāng)使用傳統(tǒng)（非均勻）分離裝置時，磁場會隨著與磁體距離的增大而減小。磁力與磁場變化有關(guān)，因此也會隨著與磁體距離的增加而減小。當(dāng)放大磁珠處理的規(guī)模時，與磁鐵距離會增加，但磁鐵的重量卻不能按比例增加以抵消這個

PureCube DIBMA–無去污劑法增溶膜蛋白2022/07/27

去垢劑（如SDS，n-辛基-β-d-葡萄糖苷(OG),n-十二烷-β-d-麥芽糖苷（DDM））被廣泛用于膜蛋白的提取，但不同去垢劑有著不同的缺點，例如短鏈非離子型去垢劑會影響膜蛋白的功能特性。幾乎可以確定的是如果將天然的磷脂雙分子層從膜蛋白中移除，膜蛋白的功能會受到影響。目前可通過MSP-nanodiscs（膜結(jié)構(gòu)蛋白-納米磷脂盤）（圖一）或者無去污劑聚合物體系（圖二）（苯乙烯-馬來酸共聚物（SMAs）、二異丁烯-馬來酸(DIBMA)）來模擬天然磷脂雙分子層。使用后者可直接從細胞中提取膜蛋白，而

Cube Biotech Rho1D4-專用于膜蛋白的抗體2022/07/27

Rho1D4是指牛視紫紅質(zhì)的細胞內(nèi)C末端的最后9個氨基酸，它是由與該序列特異性結(jié)合的單克隆抗體而命名的。通過與Rho1D4抗體結(jié)合，此序列可作為一種高特異性的純化標簽用于膜蛋白的純化。采用分子生物學(xué)方法將目的膜蛋白的C末端加上Rho1D4標簽（圖1），具有該序列的目的蛋白可被載有rho1D4抗體的親和基質(zhì)特異性結(jié)合，隨后目的蛋白可通過添加過量的Rho1D4肽與基質(zhì)抗體競爭性結(jié)合被洗脫下來，這種洗脫條件比改變pH更加溫和。圖1：具有3個跨膜結(jié)構(gòu)域的假設(shè)膜蛋白，將序列為TETSQVAPA的Rho-1

“化學(xué)發(fā)光生產(chǎn)環(huán)節(jié)的重點要素”2022/07/26

1、穩(wěn)定的可重復(fù)性分離條件？體外診斷（IVD）和其它一些的生物科技企業(yè)，在每一次磁珠功能化生產(chǎn)的過程以及在后續(xù)的分裝環(huán)節(jié)中，都會期望能獲得穩(wěn)定的可重復(fù)性?？墒?，運用傳統(tǒng)的磁性分離設(shè)備時，并非所有磁珠會處于相似的分離狀態(tài)，例如：一些磁珠*受到磁力的作用；而一些磁珠會因遠離磁鐵僅受到微弱的磁力作用；或一些磁珠相對靠近磁鐵而受到過強的磁力，可導(dǎo)致磁珠和鏈接在其上的生物分子存在被破壞的風(fēng)險（如下圖所示）。圖1展現(xiàn)對比了磁珠在傳統(tǒng)磁鐵（灰色）作用下，由于位置不同，受到的磁力不均勻；在SEPMAG®生物磁性

建立膜蛋白文庫的有效方法2022/07/26

細胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白，其承擔(dān)了大多數(shù)生物膜的功能，包括細胞與外界進行物質(zhì)運輸、信息傳遞、能量交換等發(fā)揮著重要作用。在人體蛋白中，有大約30%是膜蛋白，F(xiàn)DA批準的新藥中，大多數(shù)都以膜蛋白為靶點。隨著對膜蛋白生物作用機理的深入研究，新的細胞調(diào)控作用靶點被不斷發(fā)現(xiàn)，從而使選擇性作用于靶點的新藥能更有針對性的開發(fā)。例如現(xiàn)在市面上有不少基于細胞轉(zhuǎn)運通道蛋白設(shè)計的藥物，最常見一類抗高血壓藥，其主要功能是作為鈣離子通道阻滯劑，選擇性地同鈣離子通道結(jié)合以阻滯鈣離子進入細胞，從而導(dǎo)致心肌收縮力減弱、心

Cube Biotech新型蛋白純化DTT和EDTA高耐受產(chǎn)品2022/07/26

組氨酸標簽是應(yīng)用最為廣泛的蛋白純化標簽。其優(yōu)點包括標簽尺寸小、低免疫原性、在蛋白自然和變形狀態(tài)下都保持有效性，在去污劑以及多種添加劑成分環(huán)境下均保持有效等多方面優(yōu)勢。為了進一步提高純化體系在純化過程中的穩(wěn)定性，德國CubeBiotech生物公司現(xiàn)新推出了新型PureCube100INDIGONi-Agarose系列產(chǎn)品。這款新型的填料是以高交聯(lián)度且平均直徑為100µm的瓊脂糖為基材，其可用于更高流速要求的重力柱純化和FPLC方面應(yīng)用。PureCube100INDIGONi-Agarose系列采用

Nanodisc配合冷凍電鏡提升膜蛋白的分辨率2022/07/26

Toxic,hot,andspicy:Nanodiscsimprovemembraneproteinresolutionincryo-EM(作者：CubeBiotech)Nanodisc結(jié)合冷凍電鏡應(yīng)用時，Nanodisc提升了通過冷凍電鏡對膜蛋白的解析率，同時表現(xiàn)了功能性磷脂所扮演的重要角色。Thelastfewyearshaveseenatremendousincreaseinhigh-resolutionproteinstructuressolvedbycryoelectronmicros

Nanodisc 在 GPCR 抗體研發(fā)中的應(yīng)用2022/07/26

一、GPCR簡介GPCR（Guanosine-bindingProteinCoupledReceptor）中文名稱為G蛋白偶聯(lián)受體，是一種膜蛋白受體。GPCR作為細胞信號傳導(dǎo)中的重要蛋白，其共同點是其蛋白體結(jié)構(gòu)中都有七個跨膜結(jié)構(gòu)。研究顯示GPCR參與了很多細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，當(dāng)膜外的配體作用于該受體時，該受體的膜內(nèi)部分與G蛋白發(fā)生結(jié)合，從而激活G蛋白。G蛋白可通過兩種途徑傳遞細胞外的信息：第一種方式是打開跨膜離子通道，讓外界的離子進入；第二種方式是激活第二信使，如：cAMp、IP3/DAG等。簡單

無細胞蛋白表達2022/07/26

選擇細胞裂解物對活細胞中重組蛋白表達是很有用的，它們可以裂解真核細胞或細菌細胞，并去除蛋白質(zhì)中所有不需要表達的成分。這些裂解物可以與DNA模板和其他所需成分在試管中結(jié)合，進行蛋白質(zhì)的表達（1）。Figure1:Cell-freeexpressioncomponentsａndadditivesFigure2:Productionofatargetproteinwithlivingcells優(yōu)勢1.無細胞反應(yīng)很容易建立，僅需幾個小時就可以完成蛋白質(zhì)表達。這種方法可以用小規(guī)模（50-100微升）的反應(yīng)

如何利用GST標簽蛋白純化蛋白（上）2022/07/26

圖1：GST標簽的蛋白什么是GST標簽？目前有多種用于蛋白純化的親和標簽，而GST標簽就是其中之一。GST是谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶的簡稱，指的是整個蛋白質(zhì)，而不是像Rho1D4標簽僅指幾個氨基酸。自20世紀80年代末GST標簽就開始用于蛋白質(zhì)純化（Smith&Johnson1988），并被確立為需要高純度的蛋白質(zhì)純化試驗的可靠方法（Harper&Speicher2013）。GST標簽的大小為26kDa，因此與其它蛋白質(zhì)親和標簽相比確實很大。從理論上講，它可以與蛋白質(zhì)的C端或N端融合（Terpe200

膜蛋白研究利器（1）2022/07/26

膜蛋白研究利器：Rho1D4親和純化體系+Nanodiscs(納米磷脂盤)在人體蛋白中有大約30%是膜蛋白，膜蛋白在細胞進行物質(zhì)、信息、能量交換中發(fā)揮著重要作用，膜蛋白也成為大多數(shù)重要的藥物研究對象和靶點。ＦＤＡ批準的新藥中就有大多數(shù)都以膜蛋白為靶點，幾乎所有的膜蛋白都是研究熱點。然而讓人吃驚的是，樂觀估計，目前已經(jīng)被透徹研究清楚結(jié)構(gòu)的膜蛋白僅占膜蛋白總量的1%。究其原因，是因為膜蛋白依附或橫跨在細胞膜的磷脂雙分子層上，使膜蛋白的表達、純化、結(jié)晶和結(jié)構(gòu)分析都有很大難度。市面上有一些專用于膜蛋白提

如何獲得純凈且活性的膜蛋白2022/07/26

Rho1D4tag/1D4tagRho1D4，也叫“1D4”，是一種親和標記物，包含了九種氨基酸(T-E-T-S-Q-V-A-P-A)。該標記物優(yōu)先與目標蛋白的C端結(jié)合。瓊脂糖和磁珠與相對應(yīng)的Rho1D4-抗體能夠純化標記了Rho1D4標簽的蛋白。Rho1D4蛋白純化實驗不僅擁有基于其它抗體為基礎(chǔ)的蛋白純化特別高的專一特異性，并且蛋白的產(chǎn)量也很高。關(guān)于Rho1D4的更多信息，我們撰寫了一本指南為您提供所有必須信息。產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)用途特異性結(jié)合和純化Rho1D4標記的蛋白特異性具有與Rho1D4標記

INDIGO - 新一代His標簽純化產(chǎn)品線2022/07/26

His-tag標簽的蛋白純化是迄今為止在生物學(xué)和生物化學(xué)中常用的技術(shù)之一。然而，這種技術(shù)并非沒有其局限性，常見的his-tag標簽純化技術(shù)，如Ni-NTA，與蛋白酶抑制劑或還原劑等緩沖液中常用的物質(zhì)不相容。我們研發(fā)的INDIGO配基取代了傳統(tǒng)的NTA或IDA配基。INDIGO產(chǎn)品的優(yōu)勢Figure1:His-tagproteinpurificationusingINDIGO-NiagarosebeadsINDIGO是什么?INDIGO是一種新開發(fā)的配基，可將二價金屬離子與瓊脂糖微球結(jié)合，類似于N

化學(xué)發(fā)光試劑盒生產(chǎn)過程中，避免磁珠不可逆的聚集問題2022/07/14

避免生產(chǎn)過程中不可逆的聚集問題批次間一致性是試劑盒水平可重復(fù)性的關(guān)鍵。但在非均質(zhì)系統(tǒng)中，不可逆的聚集是批次間變異性的主要來源之一。而如果所有磁珠都受到與均勻磁性系統(tǒng)相同的力，則聚集的風(fēng)險會大大降低。傳統(tǒng)的磁性分離器所產(chǎn)生的磁場始終會由于磁力隨距離的變化而變化。因此，遠離留滯區(qū)域的磁珠受到的力很小，并且需要更長時間受到力的作用才能分離。在分離的過程中，在留滯區(qū)域附近的磁珠會長時間承受較大的力。長時間暴露于高強度磁場下會升高不可逆的磁珠聚集風(fēng)險，這便會導(dǎo)致大量批次間不一致。在大批量生產(chǎn)中，技術(shù)人員和