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Cube Biotech瓊脂糖基質(zhì)的選擇2022/07/28: 瓊脂糖由瓊脂二糖的重復(fù)單元組成，瓊脂糖珠通常是交聯(lián)多孔的，因此蛋白質(zhì)可以流過珠子的孔隙。瓊脂糖珠?？捎糜诜肿优抛杌蛴H和層析，對于親和層析，配體（如NTA或IDA）與瓊脂糖珠聚合物共價(jià)連接，可以將帶標(biāo)簽的蛋白與其他蛋白分離。瓊脂糖基質(zhì)用于蛋白質(zhì)的純化已有幾十年的歷史，市售的基于瓊脂糖的基質(zhì)種類繁多，不同基質(zhì)之間的物理性質(zhì)可能大不相同，我們這篇簡短的總結(jié)將幫助您找到*佳的產(chǎn)品。Superflow，Sepharose，Agarose的區(qū)別AgarosePureCube瓊脂糖交聯(lián)度高且在高壓下穩(wěn)定，可與

冷凍電鏡結(jié)合Nanodisc在膜蛋白研究的應(yīng)用2022/07/28: 細(xì)胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白，其參與和行使了眾多細(xì)胞功能，包括細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞、能量交換等。膜蛋白擔(dān)任了各種神經(jīng)信號分子、激素和其他底物的受體，構(gòu)成了各種離子跨膜的通道，以及構(gòu)成各類轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。在人體蛋白中，有大約30%是膜蛋白。FDA批準(zhǔn)的新藥中，大多數(shù)都以膜蛋白為靶點(diǎn)。隨著對膜蛋白工作機(jī)理的深入研究，新的細(xì)胞調(diào)控作用靶點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn)，從而使作用于靶點(diǎn)的新藥能更有針對性地被開發(fā)出。例如現(xiàn)在市面上有不少基于細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白設(shè)計(jì)的藥物，常見的一類抗高血壓藥（如氨氯地平），其主要功能是

如何利用GST標(biāo)簽蛋白純化蛋白（下）2022/07/28: 如何在質(zhì)粒中添加/克隆GST標(biāo)簽將GST標(biāo)簽添加到目標(biāo)蛋白的優(yōu)先方法是使用pGEX系列載體，它們有不同的蛋白質(zhì)裂解位點(diǎn)，而這對于后續(xù)提到的去除GST標(biāo)記方法尤其重要。圖4描述了我們推薦克隆方法的過程和步驟。（1）pGEX載體都有一個(gè)包含多個(gè)限制性酶切位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)（MSC），這些位點(diǎn)因pGEX載體而異。如表2所述。此外，所有的pGEX載體均含有三個(gè)終止密碼子，覆蓋了MSC之后DNA菌株上所有的三個(gè)可能的閱讀框，以確保所表達(dá)的蛋白質(zhì)本身并不包含終止密碼子。圖4：在目標(biāo)蛋白質(zhì)上添加GST標(biāo)簽的克隆

PureCube磁珠使用指南2022/07/28: 磁珠蛋白純化操作指南磁珠的使用采用圖1中的6個(gè)簡易步驟，即可實(shí)現(xiàn)蛋白的純化。圖1：使用磁珠/MagBeads純化蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)流程。步驟1：通常采用磁珠純化的蛋白來源于細(xì)胞裂解物，此時(shí)目的蛋白與細(xì)胞表達(dá)的其他蛋白混合在一起。第2步：向細(xì)胞裂解物中加入適量的磁珠。此步建議使用無菌移液器吸頭。第3步：孵育磁珠-蛋白質(zhì)混合物。孵育時(shí)建議采用較慢但穩(wěn)定的速度（不能渦旋）,室溫下持續(xù)約2小時(shí)即可。圖1中采用的是微型離心管，但也可以使用無菌的falcon管。第4步：孵育完成后，所有的目的蛋白質(zhì)都應(yīng)該結(jié)合到磁珠

NTA vs. IDA：NTA和IDA的區(qū)別和選擇2022/07/28: 如果您正在使用固定化金屬親和層析（IMAC）純化蛋白，您使用的金屬離子很可能是通過次氮基三乙酸（NTA）或者亞氨基二乙酸(IDA)偶聯(lián)到樹脂基質(zhì)上的。在眾多可用于IMAC的螯合配體中，NTA和IDA是常用的兩種。您更傾向于使用哪種螯合配體？您為何選擇該配體？這兩種配體有什么不同?為了幫助我們的客戶在充分了解產(chǎn)品的情況下做出訂購決定，我們以PureCubeNi-NTA瓊脂糖和PureCubeNi-IDA瓊脂糖為例，詳細(xì)介紹二者的異同。兩種配體在結(jié)構(gòu)上和化學(xué)上有何不同？螯合配體如何影響蛋白結(jié)合載量？

膜蛋白研究利器-納米磷脂盤2022/07/28: 膜蛋白在細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)、信息、能量交換中具有重要的作用和意義，因此膜蛋白成為了當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一。但是由于膜蛋白存在疏水部分，因此在體外容易聚合，所以需要找到一種合適的方法讓膜蛋白能夠穩(wěn)定地存在于細(xì)胞外的環(huán)境。傳統(tǒng)的膜蛋白提取方法是利用去污劑來提取，但是經(jīng)過去污劑提取后的膜蛋白其構(gòu)象和生物學(xué)活性都較易因?yàn)楦鞣N問題被破壞，作為“鑲嵌”在細(xì)胞膜磷脂雙分子層中的蛋白，一旦脫離了其穩(wěn)定的天然膜環(huán)境，便會(huì)影響甚至失去其生理功能，即使膜蛋白被成功地提取出來，也達(dá)不到好研究結(jié)果。早在上個(gè)世紀(jì)90年代，來自U

為什么在生產(chǎn)時(shí)磁珠損耗會(huì)增加？2022/07/28: 擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模時(shí)，與小批量生產(chǎn)相比，生產(chǎn)磁珠的問題之一是大批量生產(chǎn)可能會(huì)導(dǎo)致更大且不成比例的磁珠損耗，即使磁珠的生產(chǎn)條件與小批量的生產(chǎn)過程相似，似乎也會(huì)發(fā)生這種情況。通常情況下，當(dāng)放大生產(chǎn)工藝的規(guī)模，會(huì)有更高的生產(chǎn)效率，但當(dāng)使用傳統(tǒng)的磁性分離器放大磁珠生產(chǎn)規(guī)模時(shí)，實(shí)際情況卻并非如此。到底是怎么回事？當(dāng)使用傳統(tǒng)（非均勻）分離裝置時(shí)，磁場會(huì)隨著與磁體距離的增大而減小。磁力與磁場變化有關(guān)，因此也會(huì)隨著與磁體距離的增加而減小。當(dāng)放大磁珠處理的規(guī)模時(shí)，與磁鐵距離會(huì)增加，但磁鐵的重量卻不能按比例增加以抵消這個(gè)

PureCube DIBMA–無去污劑法增溶膜蛋白2022/07/27: 去垢劑（如SDS，n-辛基-β-d-葡萄糖苷(OG),n-十二烷-β-d-麥芽糖苷（DDM））被廣泛用于膜蛋白的提取，但不同去垢劑有著不同的缺點(diǎn)，例如短鏈非離子型去垢劑會(huì)影響膜蛋白的功能特性。幾乎可以確定的是如果將天然的磷脂雙分子層從膜蛋白中移除，膜蛋白的功能會(huì)受到影響。目前可通過MSP-nanodiscs（膜結(jié)構(gòu)蛋白-納米磷脂盤）（圖一）或者無去污劑聚合物體系（圖二）（苯乙烯-馬來酸共聚物（SMAs）、二異丁烯-馬來酸(DIBMA)）來模擬天然磷脂雙分子層。使用后者可直接從細(xì)胞中提取膜蛋白，而

Cube Biotech Rho1D4-專用于膜蛋白的抗體2022/07/27: Rho1D4是指牛視紫紅質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)C末端的最后9個(gè)氨基酸，它是由與該序列特異性結(jié)合的單克隆抗體而命名的。通過與Rho1D4抗體結(jié)合，此序列可作為一種高特異性的純化標(biāo)簽用于膜蛋白的純化。采用分子生物學(xué)方法將目的膜蛋白的C末端加上Rho1D4標(biāo)簽（圖1），具有該序列的目的蛋白可被載有rho1D4抗體的親和基質(zhì)特異性結(jié)合，隨后目的蛋白可通過添加過量的Rho1D4肽與基質(zhì)抗體競爭性結(jié)合被洗脫下來，這種洗脫條件比改變pH更加溫和。圖1：具有3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的假設(shè)膜蛋白，將序列為TETSQVAPA的Rho-1

“化學(xué)發(fā)光生產(chǎn)環(huán)節(jié)的重點(diǎn)要素”2022/07/26: 1、穩(wěn)定的可重復(fù)性分離條件？體外診斷（IVD）和其它一些的生物科技企業(yè)，在每一次磁珠功能化生產(chǎn)的過程以及在后續(xù)的分裝環(huán)節(jié)中，都會(huì)期望能獲得穩(wěn)定的可重復(fù)性。可是，運(yùn)用傳統(tǒng)的磁性分離設(shè)備時(shí)，并非所有磁珠會(huì)處于相似的分離狀態(tài)，例如：一些磁珠*受到磁力的作用；而一些磁珠會(huì)因遠(yuǎn)離磁鐵僅受到微弱的磁力作用；或一些磁珠相對靠近磁鐵而受到過強(qiáng)的磁力，可導(dǎo)致磁珠和鏈接在其上的生物分子存在被破壞的風(fēng)險(xiǎn)（如下圖所示）。圖1展現(xiàn)對比了磁珠在傳統(tǒng)磁鐵（灰色）作用下，由于位置不同，受到的磁力不均勻；在SEPMAG®生物磁性

建立膜蛋白文庫的有效方法2022/07/26: 細(xì)胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白，其承擔(dān)了大多數(shù)生物膜的功能，包括細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞、能量交換等發(fā)揮著重要作用。在人體蛋白中，有大約30%是膜蛋白，F(xiàn)DA批準(zhǔn)的新藥中，大多數(shù)都以膜蛋白為靶點(diǎn)。隨著對膜蛋白生物作用機(jī)理的深入研究，新的細(xì)胞調(diào)控作用靶點(diǎn)被不斷發(fā)現(xiàn)，從而使選擇性作用于靶點(diǎn)的新藥能更有針對性的開發(fā)。例如現(xiàn)在市面上有不少基于細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白設(shè)計(jì)的藥物，最常見一類抗高血壓藥，其主要功能是作為鈣離子通道阻滯劑，選擇性地同鈣離子通道結(jié)合以阻滯鈣離子進(jìn)入細(xì)胞，從而導(dǎo)致心肌收縮力減弱、心

Cube Biotech新型蛋白純化DTT和EDTA高耐受產(chǎn)品2022/07/26: 組氨酸標(biāo)簽是應(yīng)用最為廣泛的蛋白純化標(biāo)簽。其優(yōu)點(diǎn)包括標(biāo)簽尺寸小、低免疫原性、在蛋白自然和變形狀態(tài)下都保持有效性，在去污劑以及多種添加劑成分環(huán)境下均保持有效等多方面優(yōu)勢。為了進(jìn)一步提高純化體系在純化過程中的穩(wěn)定性，德國CubeBiotech生物公司現(xiàn)新推出了新型PureCube100INDIGONi-Agarose系列產(chǎn)品。這款新型的填料是以高交聯(lián)度且平均直徑為100µm的瓊脂糖為基材，其可用于更高流速要求的重力柱純化和FPLC方面應(yīng)用。PureCube100INDIGONi-Agarose系列采用

Nanodisc配合冷凍電鏡提升膜蛋白的分辨率2022/07/26: Toxic,hot,andspicy:Nanodiscsimprovemembraneproteinresolutionincryo-EM(作者：CubeBiotech)Nanodisc結(jié)合冷凍電鏡應(yīng)用時(shí)，Nanodisc提升了通過冷凍電鏡對膜蛋白的解析率，同時(shí)表現(xiàn)了功能性磷脂所扮演的重要角色。Thelastfewyearshaveseenatremendousincreaseinhigh-resolutionproteinstructuressolvedbycryoelectronmicros

Nanodisc 在 GPCR 抗體研發(fā)中的應(yīng)用2022/07/26: 一、GPCR簡介GPCR（Guanosine-bindingProteinCoupledReceptor）中文名稱為G蛋白偶聯(lián)受體，是一種膜蛋白受體。GPCR作為細(xì)胞信號傳導(dǎo)中的重要蛋白，其共同點(diǎn)是其蛋白體結(jié)構(gòu)中都有七個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)。研究顯示GPCR參與了很多細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，當(dāng)膜外的配體作用于該受體時(shí)，該受體的膜內(nèi)部分與G蛋白發(fā)生結(jié)合，從而激活G蛋白。G蛋白可通過兩種途徑傳遞細(xì)胞外的信息：第一種方式是打開跨膜離子通道，讓外界的離子進(jìn)入；第二種方式是激活第二信使，如：cAMp、IP3/DAG等。簡單

無細(xì)胞蛋白表達(dá)2022/07/26: 選擇細(xì)胞裂解物對活細(xì)胞中重組蛋白表達(dá)是很有用的，它們可以裂解真核細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞，并去除蛋白質(zhì)中所有不需要表達(dá)的成分。這些裂解物可以與DNA模板和其他所需成分在試管中結(jié)合，進(jìn)行蛋白質(zhì)的表達(dá)（1）。Figure1:Cell-freeexpressioncomponentsａndadditivesFigure2:Productionofatargetproteinwithlivingcells優(yōu)勢1.無細(xì)胞反應(yīng)很容易建立，僅需幾個(gè)小時(shí)就可以完成蛋白質(zhì)表達(dá)。這種方法可以用小規(guī)模（50-100微升）的反應(yīng)

如何利用GST標(biāo)簽蛋白純化蛋白（上）2022/07/26: 圖1：GST標(biāo)簽的蛋白什么是GST標(biāo)簽？目前有多種用于蛋白純化的親和標(biāo)簽，而GST標(biāo)簽就是其中之一。GST是谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶的簡稱，指的是整個(gè)蛋白質(zhì)，而不是像Rho1D4標(biāo)簽僅指幾個(gè)氨基酸。自20世紀(jì)80年代末GST標(biāo)簽就開始用于蛋白質(zhì)純化（Smith&Johnson1988），并被確立為需要高純度的蛋白質(zhì)純化試驗(yàn)的可靠方法（Harper&Speicher2013）。GST標(biāo)簽的大小為26kDa，因此與其它蛋白質(zhì)親和標(biāo)簽相比確實(shí)很大。從理論上講，它可以與蛋白質(zhì)的C端或N端融合（Terpe200

膜蛋白研究利器（1）2022/07/26: 膜蛋白研究利器：Rho1D4親和純化體系+Nanodiscs(納米磷脂盤)在人體蛋白中有大約30%是膜蛋白，膜蛋白在細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)、信息、能量交換中發(fā)揮著重要作用，膜蛋白也成為大多數(shù)重要的藥物研究對象和靶點(diǎn)。ＦＤＡ批準(zhǔn)的新藥中就有大多數(shù)都以膜蛋白為靶點(diǎn)，幾乎所有的膜蛋白都是研究熱點(diǎn)。然而讓人吃驚的是，樂觀估計(jì)，目前已經(jīng)被透徹研究清楚結(jié)構(gòu)的膜蛋白僅占膜蛋白總量的1%。究其原因，是因?yàn)槟さ鞍滓栏交驒M跨在細(xì)胞膜的磷脂雙分子層上，使膜蛋白的表達(dá)、純化、結(jié)晶和結(jié)構(gòu)分析都有很大難度。市面上有一些專用于膜蛋白提

如何獲得純凈且活性的膜蛋白2022/07/26: Rho1D4tag/1D4tagRho1D4，也叫“1D4”，是一種親和標(biāo)記物，包含了九種氨基酸(T-E-T-S-Q-V-A-P-A)。該標(biāo)記物優(yōu)先與目標(biāo)蛋白的C端結(jié)合。瓊脂糖和磁珠與相對應(yīng)的Rho1D4-抗體能夠純化標(biāo)記了Rho1D4標(biāo)簽的蛋白。Rho1D4蛋白純化實(shí)驗(yàn)不僅擁有基于其它抗體為基礎(chǔ)的蛋白純化特別高的專一特異性，并且蛋白的產(chǎn)量也很高。關(guān)于Rho1D4的更多信息，我們撰寫了一本指南為您提供所有必須信息。產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)用途特異性結(jié)合和純化Rho1D4標(biāo)記的蛋白特異性具有與Rho1D4標(biāo)記

INDIGO - 新一代His標(biāo)簽純化產(chǎn)品線2022/07/26: His-tag標(biāo)簽的蛋白純化是迄今為止在生物學(xué)和生物化學(xué)中常用的技術(shù)之一。然而，這種技術(shù)并非沒有其局限性，常見的his-tag標(biāo)簽純化技術(shù)，如Ni-NTA，與蛋白酶抑制劑或還原劑等緩沖液中常用的物質(zhì)不相容。我們研發(fā)的INDIGO配基取代了傳統(tǒng)的NTA或IDA配基。INDIGO產(chǎn)品的優(yōu)勢Figure1:His-tagproteinpurificationusingINDIGO-NiagarosebeadsINDIGO是什么?INDIGO是一種新開發(fā)的配基，可將二價(jià)金屬離子與瓊脂糖微球結(jié)合，類似于N

化學(xué)發(fā)光試劑盒生產(chǎn)過程中，避免磁珠不可逆的聚集問題2022/07/14: 避免生產(chǎn)過程中不可逆的聚集問題批次間一致性是試劑盒水平可重復(fù)性的關(guān)鍵。但在非均質(zhì)系統(tǒng)中，不可逆的聚集是批次間變異性的主要來源之一。而如果所有磁珠都受到與均勻磁性系統(tǒng)相同的力，則聚集的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)大大降低。傳統(tǒng)的磁性分離器所產(chǎn)生的磁場始終會(huì)由于磁力隨距離的變化而變化。因此，遠(yuǎn)離留滯區(qū)域的磁珠受到的力很小，并且需要更長時(shí)間受到力的作用才能分離。在分離的過程中，在留滯區(qū)域附近的磁珠會(huì)長時(shí)間承受較大的力。長時(shí)間暴露于高強(qiáng)度磁場下會(huì)升高不可逆的磁珠聚集風(fēng)險(xiǎn)，這便會(huì)導(dǎo)致大量批次間不一致。在大批量生產(chǎn)中，技術(shù)人員和

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