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色譜柱常見(jiàn)問(wèn)題（五）
2020年06月10日 13:51:35
來(lái)源：化工儀器網(wǎng) 點(diǎn)擊量：5999
進(jìn)行該操作，是因?yàn)樯V柱到達(dá)用戶手中的時(shí)間長(zhǎng)短不一，在存儲(chǔ)和運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，可能存儲(chǔ)液有些揮發(fā)，低流速的甲醇可以很好的浸潤(rùn)固定相，使鍵合相很好的伸展。用溶劑平衡好系統(tǒng)后，如果要更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，可以采取多次進(jìn)樣或者加大進(jìn)樣量的方式，這樣用樣品將色譜柱中的活化點(diǎn)飽和，就不會(huì)出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。
【化工儀器網(wǎng) 技術(shù)指導(dǎo)】色譜柱是色譜的核心部件，色譜柱出問(wèn)題會(huì)直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。了解色譜柱常見(jiàn)問(wèn)題，助您更好的只用色譜儀。
1、拿到C18柱后會(huì)用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，目的是什么？
進(jìn)行該操作，是因?yàn)樯V柱到達(dá)用戶手中的時(shí)間長(zhǎng)短不一，在存儲(chǔ)和運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，可能存儲(chǔ)液有些揮發(fā)，低流速的甲醇可以很好的浸潤(rùn)固定相，使鍵合相很好的伸展。用溶劑平衡好系統(tǒng)后，如果要更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，可以采取多次進(jìn)樣或者加大進(jìn)樣量的方式，這樣用樣品將色譜柱中的活化點(diǎn)飽和，就不會(huì)出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。
2、C18柱曾保存在酸性環(huán)境中，會(huì)對(duì)柱子有什么損壞嗎？
保存的酸性環(huán)境如果不含緩沖鹽，只是短期幾天保存在酸性流動(dòng)相中，無(wú)需過(guò)于擔(dān)心，但可能減少幾天的使用壽命。如果有緩沖鹽，保存期間水分揮發(fā)可能會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽結(jié)晶在柱內(nèi)析出，對(duì)柱子損傷很大。
3、 新出廠液相色譜柱，保護(hù)溶劑一般是什么？怎樣進(jìn)行平衡清洗？
根據(jù)柱子類型的不同，保存溶劑一般不一樣，具體要看說(shuō)明書(shū)。一般反相柱用甲醇(乙腈)保存，也有用80%左右甲醇濃度的甲醇/水保存的。
平衡清洗時(shí)一般用流動(dòng)相平衡沖洗10-20個(gè)柱體積即可。
4、色譜柱的安裝有什么技巧嗎？
色譜柱安裝技巧不多，只要接頭和柱頭匹配，確實(shí)擰緊不漏就可以了，但也要注意不要擰得太緊以至于損傷螺紋。
5、測(cè)定多肽樣品時(shí)，會(huì)出現(xiàn)峰前延或峰拖尾的情況，是什么原因呢？
峰前延或拖尾，一般不是色譜柱的問(wèn)題，應(yīng)該是樣品和色譜柱填料的作用問(wèn)題。也就是說(shuō)，如果色譜柱類型選擇沒(méi)錯(cuò)，我們就可以關(guān)注色譜條件的選擇，如進(jìn)樣量、樣品溶劑、流動(dòng)相組成(包括添加劑)、流動(dòng)相pH以及柱溫。另外測(cè)定分子量較大的多肽，用樣品老化平衡色譜柱很重要，分子量越大的物質(zhì)，需要平衡時(shí)間越長(zhǎng)。
6、三乙胺磷酸鹽緩沖液作流動(dòng)相，柱壓越來(lái)越高該怎么樣解決？
再生柱子，比如對(duì)色譜柱進(jìn)行反沖。
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