肺纖維化動(dòng)物模型的造模方法如下:
前期準(zhǔn)備:AdTGF-β1223/225 及腺病毒空載體 -70℃保存,臨用前經(jīng)病毒稀釋液稀釋成 1×109pfu(病毒稀釋液由三種溶液構(gòu)成,其配制方法:A 液:NaCl 8 g,KCl 0.2 g,Na2HPO4 1.15 g,KH2PO4 0.2 g,加雙蒸水定容至100 mL,高壓消毒;B 液:CaCl2·2H2O 0.1 g 定容至 10 mL,高壓消毒;C 液:MgCl2·6H2O 0.1 g 定容至 10 mL,高壓消毒。用前取 98 mL A 液、1 mL B 液、1 mL C 液混合備用。
操作步驟:選用 SD 大鼠,體質(zhì)量(250±15) g,腹腔注射速眠新麻醉(0.4 mL·kg-1),無菌操作,剪開頸部皮膚,鈍性分離頸部肌肉,充分暴露氣管,經(jīng)喉頭下一次性注入 0.4 mL AdTGF-β1223/225 腺病毒液,手術(shù) 6 h 后觀察并記錄動(dòng)物生理反應(yīng)。
模型驗(yàn)證:分別與造模后 d 7、d 14、d 21,麻醉后開胸,左心室插管,先灌流溫?zé)幔ㄊ覝兀┥睇}水,剪開右心耳放血,待流出液變澄清后再緩慢灌流 4% 多聚甲醛水溶液(200 mL·30 min-1)。小心摘取整個(gè)肺和心,經(jīng)氣管恒壓(2 452 Pa)灌注 4% 多聚甲醛固定液 10 min,使肺泡恢復(fù)擴(kuò)張狀態(tài)。沿縱軸切取肺組織浸入 4% 多聚甲醛固定液中固定 24 h,做常規(guī)石蠟包埋、石蠟切片、HE 染色和 Mallory 染色,光鏡觀察、攝片。