免疫組化染色步驟:
1 冰凍切片4~8um,室溫放置30分鐘后,入4℃丙酮固定10分鐘,PBS洗,5分鐘×3。用3%過氧化氫孵育5~10分鐘,消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗,5分鐘×2。
2 5~10%正常山羊血清封閉,室溫孵育10分鐘。傾去血清,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小時(shí)或4℃過夜。
3 PBS沖洗,5分鐘×3次。
4 滴加適當(dāng)比例稀釋的標(biāo)記二抗,37℃孵育10~30分鐘;或滴加第二代標(biāo)記二抗工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
PBS沖洗,5分鐘×3次。
5 滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素,37℃孵育10~30分鐘;或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
6 PBS沖洗,5分鐘×3次。
7 顯色劑顯色
8 自來水充分沖洗,復(fù)染,封片。