1. 取出細(xì)胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分鐘。

2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

3. 打孔液浸泡 5 分鐘。

4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

5. 正常血清封閉：從染片缸中取出切片，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分滴加正常山羊或兔血清處理，37 ℃，15 分鐘。

6. 滴加第一抗體：用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加第一抗體，37 ℃ 2 小時(也可置于 4 ℃冰箱過夜) 。

7. PBS：5 分鐘，2 次 。

8. 滴加二抗，37℃，40 分鐘。

9. PBS：5 分鐘，2 次 。

10. 滴加三抗  ，37 ℃，40 分鐘。

11. PBS：5 分鐘，2 次

12. DAB 顯色，鏡下觀察，適時終止。

13. 自來水(細(xì)水)充分沖洗。

14. 蘇木素復(fù)染，室溫，30 秒，自來水沖洗。

15. 自來水沖洗返藍，15 分鐘。

16. 梯度酒精脫水：80%，2 分鐘 95%，2 分鐘 100%，2 次，5 分鐘。

17. 二甲苯透明：I ，II (二甲苯)各 5 分鐘

18. 封片：加拿大樹膠(或中性樹膠)封片