2025-06-27
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保存溫度
2-8℃避光
注意事項(xiàng)
1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
2.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
2.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
有效期
一年
檢測(cè)方法
顯微鏡
適用樣本
1. 石蠟切片
2. 冰凍切片
2. 冰凍切片
儀器準(zhǔn)備
1. 顯微鏡
2. 37℃溫箱
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 37℃溫箱
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
試劑準(zhǔn)備
1. 固定液：選用甲醛或甲醛鹽溶液
2. 蒸餾水
3. 系列乙醇
2. 蒸餾水
3. 系列乙醇
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
1. 取A1、A2等量混合即為 Weigert鐵蘇木素染液，一般24h失去染色力。
2. 每個(gè)染色步驟均要保持玻片濕潤(rùn)。
3. 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
4. 固定起著重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時(shí)間。
5. 試劑B分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類型很新舊不同。
6. 試劑F磷鉬酸分化時(shí)要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時(shí)間根據(jù)染色深淺而定，一般1～2min。
7. 鏡檢觀察時(shí)若膠原纖維部分藍(lán)色著色太淺，可用復(fù)染液復(fù)染2-3分鐘，至顏色合適為止。復(fù)染液染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否者顏色過(guò)深會(huì)造成對(duì)比不強(qiáng)烈。
8. 若整體染色效果不佳，可用水浸泡60-90分鐘，褪色后，再重復(fù)染色。
2. 每個(gè)染色步驟均要保持玻片濕潤(rùn)。
3. 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
4. 固定起著重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時(shí)間。
5. 試劑B分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類型很新舊不同。
6. 試劑F磷鉬酸分化時(shí)要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時(shí)間根據(jù)染色深淺而定，一般1～2min。
7. 鏡檢觀察時(shí)若膠原纖維部分藍(lán)色著色太淺，可用復(fù)染液復(fù)染2-3分鐘，至顏色合適為止。復(fù)染液染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否者顏色過(guò)深會(huì)造成對(duì)比不強(qiáng)烈。
8. 若整體染色效果不佳，可用水浸泡60-90分鐘，褪色后，再重復(fù)染色。
使用方法
試劑配制：
臨用前A1和A2等量混合均勻即為染液A，24小時(shí)內(nèi)使用，不可預(yù)先配制。
樣本的染色前處理：
石蠟切片
1. 脫蠟：二甲苯中脫蠟10-15分鐘。再換用新鮮的二甲苯脫蠟10-15分鐘。
2. 將脫蠟后的片子用95%乙醇浸泡2分鐘，再分別用70%、30%乙醇各2分鐘。
3. 水合：蒸餾水中浸泡2分鐘。
4. 漂洗：30-40℃水漂洗兩次，每次30-60秒。
樣本的染色
1. 用蒸餾水潤(rùn)濕玻片30-60秒。
2. 用新鮮配制的染色液A染色5-10分鐘。
3. 分色液B分色6-8分鐘。水洗。
4. 試劑C處理2-3分鐘。
5. 蒸餾水水洗1-2分鐘。
6. 染色液D染色5-10分鐘。
7. 按蒸餾水：弱酸E=2:1配制弱酸工作溶液，用弱酸工作液洗1分鐘。
8. 試劑F洗1-2分鐘。需要在鏡下觀察，處理到膠原纖維城淡紅色；纖維紅色即可。
9. 用弱酸工作液洗1分鐘。
10. 染色液G苯胺藍(lán)染色1-2分鐘。
11. 用弱酸工作液洗1分鐘。
12. 95%乙醇快速脫水。
13. 無(wú)水乙醇脫水3次，每次5秒。
14. 二甲苯透明3次，每次1分鐘。
15. 用封固劑封片。
16. 結(jié)果觀察。
結(jié)果：
細(xì)胞核、膠原纖維、粘液、軟骨為藍(lán)色；
胞漿、肌肉、紅細(xì)胞、纖維素、神經(jīng)膠原為紅色。
臨用前A1和A2等量混合均勻即為染液A，24小時(shí)內(nèi)使用，不可預(yù)先配制。
樣本的染色前處理：
石蠟切片
1. 脫蠟：二甲苯中脫蠟10-15分鐘。再換用新鮮的二甲苯脫蠟10-15分鐘。
2. 將脫蠟后的片子用95%乙醇浸泡2分鐘，再分別用70%、30%乙醇各2分鐘。
3. 水合：蒸餾水中浸泡2分鐘。
4. 漂洗：30-40℃水漂洗兩次，每次30-60秒。
樣本的染色
1. 用蒸餾水潤(rùn)濕玻片30-60秒。
2. 用新鮮配制的染色液A染色5-10分鐘。
3. 分色液B分色6-8分鐘。水洗。
4. 試劑C處理2-3分鐘。
5. 蒸餾水水洗1-2分鐘。
6. 染色液D染色5-10分鐘。
7. 按蒸餾水：弱酸E=2:1配制弱酸工作溶液，用弱酸工作液洗1分鐘。
8. 試劑F洗1-2分鐘。需要在鏡下觀察，處理到膠原纖維城淡紅色；纖維紅色即可。
9. 用弱酸工作液洗1分鐘。
10. 染色液G苯胺藍(lán)染色1-2分鐘。
11. 用弱酸工作液洗1分鐘。
12. 95%乙醇快速脫水。
13. 無(wú)水乙醇脫水3次，每次5秒。
14. 二甲苯透明3次，每次1分鐘。
15. 用封固劑封片。
16. 結(jié)果觀察。
結(jié)果：
細(xì)胞核、膠原纖維、粘液、軟骨為藍(lán)色；
胞漿、肌肉、紅細(xì)胞、纖維素、神經(jīng)膠原為紅色。
參考文獻(xiàn)
1. Yuyan Lu, et al.
Valsartan attenuates pulmonary hypertension via suppression of mitogen activated protein kinase signaling and matrix metalloproteinase expression in rodents
Molecular Medicine Reports 2017
2. Fei Hou, et al.
Attenuation of liver fibrosis by herbal compound 861 via upregulation of BMP-7/Smad signaling in the bile duct ligation model rat
Molecular Medicine Reports 2016
3. Huikuan Gao, et al.
Sequential changes in autophagy in diabetic cardiac fibrosis
Molecular Medicine Reports 2015
Valsartan attenuates pulmonary hypertension via suppression of mitogen activated protein kinase signaling and matrix metalloproteinase expression in rodents
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2. Fei Hou, et al.
Attenuation of liver fibrosis by herbal compound 861 via upregulation of BMP-7/Smad signaling in the bile duct ligation model rat
Molecular Medicine Reports 2016
3. Huikuan Gao, et al.
Sequential changes in autophagy in diabetic cardiac fibrosis
Molecular Medicine Reports 2015
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