2xTaq PCR Forest Mix 綠色（含染料）
2025-07-24
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2xTaq PCR Forest Mix 綠色（含染料）
產(chǎn)品貨號：T0212
存儲條件：-20℃
產(chǎn)品說明
2xTaq PCR Forest Mix 綠色（含染料）的濃度為 2x，使用方便快捷，能減少 PCR操作過程中的污染，使用時只需取適量2xTaq PCR Forest Mix綠色)，加入模板和引物，并加入ddH2O 補足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1x，即可進行 PCR 反應(yīng)。PCR 產(chǎn)物 3'端帶突出A堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。
本產(chǎn)品能夠高效擴增≤5 kb 的 DNA 片段，擴增產(chǎn)量高PCR Mix中包含兩種染料，PCR產(chǎn)物無需添加Loading Buffer可直接點樣電泳，且電泳過程中會出現(xiàn)兩個指示條帶。該染料不影響PCR擴增效率，但對于需要對PCR產(chǎn)物進行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實驗，建議在分析前對PCR產(chǎn)物進行純化，或使用無染料的PCR Master Mix。
質(zhì)量控制
核酸內(nèi)切酶活性檢測
將25 μl 2xTaq PCR Forest Mix與 200 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 配制成 50 μl 反應(yīng)體系，在37°C下，共同溫育4h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于 10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài)。
非特異性核酸酶活性檢測
將25 μl 2xTaq PCR Forest Mix與 15 ng 雙鏈 DNA 片段配制成 50 μl反應(yīng)體系，在 37℃下溫育 16 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化。
使用方法
1.常規(guī) PCR 反應(yīng)體系 ( 冰上操作 )
試劑 | 使用量 | 終濃度 |
2xTaq PCR Forest Mixa | 25 ul | 1x |
正向引物(10uM)b | 1~2 ul | 0.2~0.4uM |
反向引物(10uM)b | 1~2 ul | 0.2~0.4uM |
模板DNAc | X ul | |
ddH2O | Up to 50 ul |
a. 需融解完quan后使用，防止離子濃度不均勻；
b. 引物推薦終濃度為0.2~0.4 μM，效果不佳時可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進行調(diào)整；
c. 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50 μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時一般推薦的使用量為 10~400 ng；當模板為質(zhì)?；虿《?DNA 時，一般推薦的使用量為 10 pg~20 ng。
2. 三步法 PCR 反應(yīng)程序
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán) |
預(yù)變性d | 95℃ | 3~5 min | |
變性 | 95℃ | 30 s | 30-35cycles |
退火e | 55~65℃ | 30 s | |
延伸f | 72℃ | 30~60 s/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min |
d. 菌落 PCR 時預(yù)變性 10 min，可充分破壁細胞，大腸桿菌或酵母菌均可高效擴增。
e. 退火溫度請根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置。如果需要，推薦通過建立溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外，退火溫度直接決定擴增特異性，如發(fā)現(xiàn)擴增特異性差，可適當提高退火溫度。
f. 目的片段長度< 3 kb，延伸時間可縮短至 30 s/kb；目的片段長度>3 kb，延伸時間建議 60 s/kb。
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