熒光定量PCR檢測技術(shù)服務(wù)-Taqman探針法
- 公司名稱 上海基屹生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/5/13 9:06:59
- 訪問次數(shù) 7397
聯(lián)系方式：盛經(jīng)理18516235431、13636417775 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real Time Quantitative PCR）
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
相對(duì)定量應(yīng)用（Relative Quantification，RQ）
特異性熒光標(biāo)記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對(duì)定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
服務(wù)流程：
步驟 | 客 戶 提 供 | 服 務(wù) 內(nèi) 容 | 基 屹 提 供 |
1 | 新鮮的且盡量多的材料；已知的全長基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。 | DNA/RNA提取，根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。 | |
2 | 純化好的DNA/RNA（大于5 ug/樣品）；已知的全長基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。 | 根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。 | |
3 | 以DNA為模板，對(duì)目的基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測分析 | 提供完整的定量分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)熒光定量擴(kuò)增曲線及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟。 |
注意：客戶可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動(dòng)項(xiàng)目。
采購中心
化工儀器網(wǎng)