產(chǎn)品名稱(chēng)： Ni-NTA-瓊脂糖 KIRGEN
KG8222     Ni-NTA-瓊脂糖    25ml
KG8223     Ni-NTA-瓊脂糖    50ml
Ni-NTA-瓊脂糖 KIRGEN蛋白提純?cè)恚篘I-NTA主要用于帶His標(biāo)簽蛋白的親和層析.
① Ni-NTA：瓊脂糖或者其他基質(zhì)共價(jià)連接NTA基團(tuán),NTA基團(tuán)與Ni形成四價(jià)螯合物,并留下Ni兩價(jià)用于與其他基團(tuán)結(jié)合.同樣作用的還有IDA基團(tuán),但NTA相對(duì)比較耐還原劑,因此使用較多.
② 組氨酸（His）的R基上帶有1個(gè)咪唑基團(tuán),咪唑基團(tuán)pKa值在6左右,在pH＞7的條件下,咪唑基團(tuán)帶負(fù)電,容易與Ni離子結(jié)合.
③ 因此通過(guò)Ni-NTA吸附住的蛋白可以使用咪唑、組氨酸、或者其他含N化合物進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)洗脫,也可以通過(guò)降低pH值使咪唑基團(tuán)帶正電從而洗脫蛋白.
④ NI-NTA上的Ni可以通過(guò)EDTA進(jìn)行螯合競(jìng)爭(zhēng)洗脫下來(lái).
⑤ 同樣的道理,其他過(guò)渡金屬離子如Cu2+、Co2+等也能起到和Ni一樣的作用,但是相比來(lái)說(shuō),Ni不容易引起蛋白變性.所以Ni柱較為常用.
⑥ 除了組氨酸外,還有一些氨基酸殘基如半胱氨酸等也能與金屬結(jié)合,但結(jié)合力比起組氨酸來(lái)說(shuō)較弱.可以通過(guò)加入NaCl等消除這種吸附.

產(chǎn)品說(shuō)明：鎳NTA親和層析介質(zhì)，是由螯合劑（NTA）共價(jià)偶聯(lián)到Sepharose瓊脂糖介質(zhì)（6%交聯(lián)度）上，再螯合Ni2+而成。該介質(zhì)對(duì)6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，采用Sepharose瓊脂糖介質(zhì)比Agarose瓊脂糖介質(zhì)效果更好，顆粒粒度均勻，粒徑小，并且螯合鎳更穩(wěn)定，能耐受更高的還原劑，物理和化學(xué)穩(wěn)定性好，批次重復(fù)性好。已經(jīng)螯合好鎳離子，可直接用于6×His-tag融合蛋白的純化。