RIPA裂解液（強）

1.產(chǎn)品簡介：

    我們生產(chǎn)的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA裂解液(強)的主要成分為50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒(WB0201/WB0202)測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

2.包裝清單：

3.保存條件：4℃保存，一年有效。

4. 使用方法:

A. 對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

取適當(dāng)量的RIPA裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1 mM。

B. 對于貼壁細(xì)胞樣品：

去除培養(yǎng)液用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。輕輕的搖晃約5-10 min。充分裂解后，10000-14000 g離心10 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。

表--裂解液用量說明： 用于不同規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)板裂解液容量

C. 對于懸浮細(xì)胞樣品：

離心收集細(xì)胞，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈或旋渦震蕩5-10 min以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000 g離心10 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。

D. 對于組織樣品：

1) 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切成幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。

2) 取適當(dāng)量的RIPA裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1 mM。

3) 按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品, 可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。

4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

5) 充分裂解后,10000-14000 g離心3- 5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)作。

5. 注意事項：

1) 抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接以液體狀態(tài)置-20℃中保存，不要反復(fù)凍融。

2) 需自備PMSF。建議在臨用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1  mM。PMSF(WBR0114)可以向我公司訂購。

3) RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；否則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

*本試劑僅供實驗室研究使用

若有需求請在詢價詳細(xì)說明里面標(biāo)注您的