BY-1016 TPA 2-14小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1016
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- 更新時(shí)間 2025/7/27 17:33:20
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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TPA 2-14小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系
TPA 2-14小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系是特異性抗體制備與相關(guān)抗原檢測領(lǐng)域的重要細(xì)胞模型，憑借穩(wěn)定的抗體分泌能力、優(yōu)異的抗原識別特異性及良好的體外培養(yǎng)性能，在特定疾病分子檢測、免疫診斷試劑研發(fā)及相關(guān)免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，為獲取高質(zhì)量單克隆抗體及功能探索提供了可靠載體。
來源與背景：該細(xì)胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物，通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)特定抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細(xì)胞與永生化骨髓瘤細(xì)胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細(xì)胞，再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體特異性檢測，最終得到能穩(wěn)定分泌針對目標(biāo)抗原的單克隆抗體的細(xì)胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體特異性不足、成分復(fù)雜的問題，為獲得均一性高、靶向性強(qiáng)的抗體提供了穩(wěn)定來源，自建立以來，在相關(guān)疾病免疫檢測方法的構(gòu)建中發(fā)揮了重要作用。
細(xì)胞特性：形態(tài)呈現(xiàn)典型雜交瘤細(xì)胞特征，貼壁生長時(shí)為上皮樣多邊形，細(xì)胞質(zhì)含與抗原識別相關(guān)的顆粒，細(xì)胞核大而圓，核質(zhì)比約 1:2.4，約 6% 的細(xì)胞可見雙核結(jié)構(gòu)。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定高效，分泌量達(dá) 7-13μg/10?細(xì)胞 / 24h，連續(xù)傳代 54 次后，抗體分泌能力僅下降 7%；抗原結(jié)合特異性高，與靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達(dá) 10??M 級別，與同源抗原交叉反應(yīng)率低于 0.7%；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 51-57 小時(shí)，克隆形成率 39%，腹腔接種 BALB/c 小鼠后，12-18 天形成腹水，腹水中抗體濃度達(dá) 3-7mg/ml。傳代采用常規(guī)方法，傳代比例 1:3-1:4，細(xì)胞密度達(dá) 70%-75% 時(shí)及時(shí)傳代，過度密集會使抗體分泌量下降 15% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素及 0.4% 特定抗原相關(guān)組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵要點(diǎn)：血清質(zhì)量關(guān)鍵，需用低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.3EU/ml），劣質(zhì)血清會使細(xì)胞活力降低 23%，抗體分泌量減少 29%；添加物作用顯著，特定組織提取液可維持抗體靶向性，缺失會導(dǎo)致抗體與靶抗原結(jié)合率下降 19%；無血清培養(yǎng)適配性較好，添加適量胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白及相關(guān)生長因子可維持細(xì)胞生長，抗體純度達(dá) 93% 以上；腹水制備規(guī)范，小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷，7 天后接種 1.2×10?個細(xì)胞，13-19 天收集腹水，每只收獲 3-6ml，純化后仍保持對靶抗原的高親和力。凍存用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 48 小時(shí)貼壁率達(dá) 78%，抗體分泌功能恢復(fù) 83% 以上。
檢測鑒定：經(jīng)嚴(yán)格微生物檢測，無細(xì)菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。抗體亞型為 IgG2b 型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、免疫印跡等驗(yàn)證，能特異性結(jié)合靶抗原，交叉反應(yīng)率低；染色體核型分析顯示，染色體數(shù)目 83-93 條，融合親本細(xì)胞染色體特征；功能驗(yàn)證中，用于相關(guān)組織切片免疫染色時(shí)，陽性信號清晰，背景干擾低，證實(shí)其實(shí)用性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在相關(guān)疾病分子檢測中，基于其抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達(dá) 0.45ng/ml，適用于多種樣本中靶抗原的定量分析；在診斷試劑研發(fā)中，開發(fā)的免疫熒光探針用于病理切片檢測，診斷符合率達(dá) 90%。在免疫學(xué)研究中，可用于抗原表位分析，為疫苗設(shè)計(jì)提供信息。此外，該細(xì)胞系可優(yōu)化抗體生產(chǎn)工藝，提升產(chǎn)量 1.3-1.9 倍，降低規(guī)?；a(chǎn)成本，為相關(guān)疾病精準(zhǔn)診斷及研究提供支持。
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