BY-1404 RM-S1獼猴皮膚細胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1404
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/27 17:39:24
- 訪問次數(shù) 318
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
表型標志物表達:高表達成纖維細胞特異性標志物,如波形蛋白(Vimentin)、α- 平滑肌肌動蛋白(α-SMA),免疫熒光陽性率>95%;同時表達皮膚組織特異性蛋白,如 Ⅰ 型膠原蛋白、纖維連接蛋白,分泌量分別達 20μg/10?細胞 / 天和 15μg/10?細胞 / 天,接近原代皮膚成纖維細胞水平。
病毒敏感性:對皮膚嗜性病毒具有高度敏感性,尤其對猴痘病毒、牛痘病毒的感染效率達 90% 以上,病毒滴度可達 10?-10? PFU/mL,感染后 24 小時即可觀察到典型細胞病變(胞質(zhì)內(nèi)包涵體形成、細胞腫脹);對人乳頭瘤病毒(HPV)的支持能力突出,可維持病毒 episome 形式存在,為皮膚病毒潛伏感染研究提供模型。
創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)功能:在體外劃痕實驗中,細胞遷移速率達 50μm / 小時,可在 48 小時內(nèi)完成劃痕閉合;受損傷刺激后,轉(zhuǎn)化生長因子 -β1(TGF-β1)分泌量提升 3 倍,促進膠原蛋白合成,模擬體內(nèi)創(chuàng)傷修復(fù)過程。
皮膚病毒感染機制研究
病毒入侵與擴散研究:利用 RM-S1 細胞模擬皮膚微環(huán)境,解析猴痘病毒的皮膚傳播機制。通過熒光標記病毒實驗,觀察到病毒通過細胞間連接擴散,依賴 E-cadherin 介導(dǎo)的細胞黏附,阻斷該分子后病毒擴散效率下降 70%,為阻斷皮膚病毒傳播提供靶點。
潛伏感染模型構(gòu)建:因可支持 HPV 持續(xù)感染,可用于研究病毒潛伏機制。例如,HPV16 在 RM-S1 細胞中可穩(wěn)定潛伏 60 天以上,通過檢測 E6/E7 蛋白的低水平表達,發(fā)現(xiàn)其通過表觀遺傳修飾(如 DNA 甲基化)維持潛伏狀態(tài),為開發(fā)潛伏感染干預(yù)藥物提供依據(jù)。
創(chuàng)傷修復(fù)與皮膚再生研究
修復(fù)機制解析:通過構(gòu)建 RM-S1 細胞與角質(zhì)形成細胞共培養(yǎng)模型,研究皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的細胞間相互作用。發(fā)現(xiàn)成纖維細胞分泌的肝細胞生長因子(HGF)可促進角質(zhì)形成細胞遷移,中和 HGF 后修復(fù)效率下降 50%,證實其在表皮再生中的關(guān)鍵作用。
再生材料評估:可用于測試新型生物材料的兼容性與促修復(fù)能力。例如,將膠原蛋白 - 殼聚糖支架與 RM-S1 細胞共培養(yǎng),細胞在支架上的增殖率比單純培養(yǎng)提升 2 倍,支架降解產(chǎn)物可促進 TGF-β1 分泌,為皮膚再生材料優(yōu)化提供數(shù)據(jù)。
外用藥物篩選與安全性評價
抗病du藥物篩選:基于對猴痘病毒的高敏感性,構(gòu)建 96 孔板藥物篩選模型,日均可檢測 300 種化合物。篩選出的阿xi洛韋衍生物對病毒的 EC??=2μM,且對細胞毒性低(CC??>100μM),動物實驗顯示其可縮短猴痘皮損愈合時間 30%,為皮膚病毒感染治療提供候選藥物。
化妝品與外用制劑安全性測試:替代動物實驗用于皮膚刺激性評估,通過檢測藥物對 RM-S1 細胞活力、乳酸脫氫酶釋放的影響,結(jié)合 IL-6 分泌水平,建立皮膚刺激性評分標準,與兔皮膚刺激實驗結(jié)果一致性達 85%,符合 3R 原則(減少、替代、優(yōu)化)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 5ng/mL 堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)促進細胞增殖。
傳代流程:當細胞融合度達 80% 時,棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入 0.25% yi酶 - EDTA 溶液,37℃孵育 3 分鐘至細胞變圓,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免過度融合導(dǎo)致細胞形態(tài)改變。
凍存保護:取對數(shù)生長期細胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時 37℃水浴快速解凍,直接接種至預(yù)熱培養(yǎng)基(無需離心),傳代 1 次后即可用于實驗。
病毒感染與創(chuàng)傷模型操作
病毒接種:細胞以 5×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時至融合度 70%,用無血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.1),37℃吸附 2 小時,換含 2% 血清的維持液,每日觀察細胞病變,72 小時后通過蝕斑實驗測定病毒滴度。
劃痕實驗:細胞鋪滿 6 孔板后,用 200μL 槍頭垂直劃痕,PBS 洗滌去除脫落細胞,加入含 1% 血清的培養(yǎng)基,0 小時和 48 小時拍照,ImageJ 軟件計算劃痕閉合率。
優(yōu)勢:
組織特異性強:保留皮膚成纖維細胞的功能特征,較通用細胞系(如 Vero)更適合皮膚相關(guān)研究,結(jié)果參考價值更高。
靈長類模型優(yōu)勢:與人類皮膚細胞的同源性高(基因序列一致性>95%),研究結(jié)果對人類疾病的轉(zhuǎn)化價值優(yōu)于嚙齒類細胞模型。
功能多樣性:既可用于病毒研究,又能支撐創(chuàng)傷修復(fù)與藥物測試,適用范圍廣泛。
局限性:
增殖能力有限:傳代超過 60 次后增殖速率下降約 20%,需定期復(fù)蘇早期凍存細胞。
培養(yǎng)成本較高:需添加生長因子維持功能,培養(yǎng)基成本高于普通細胞系。
病毒譜局限:對非皮膚嗜性病毒(如呼吸道病毒)敏感性低,應(yīng)用范圍受限。
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