BY-0803 WEHI 231小鼠B淋巴細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0803
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- 更新時(shí)間 2025/7/29 9:43:45
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WEHI 231小鼠B淋巴細(xì)胞系
WEHI 231小鼠B淋巴細(xì)胞系源自 BALB/c 小鼠的 B 細(xì)胞淋巴瘤，是保留未成熟 B 細(xì)胞表型和高凋亡敏感性的經(jīng)典模型，在 B 細(xì)胞分化、抗體生成調(diào)控及凋亡機(jī)制研究中具有不可替代的價(jià)值，尤其因?qū)?B 細(xì)胞受體（BCR）信號(hào)的du特反應(yīng)性，成為解析 B 細(xì)胞耐受與活化平衡的關(guān)鍵工具。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的未成熟 B 細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細(xì)胞呈圓形或類圓形，以懸浮生長為主，偶見松散聚集體（直徑＜100μm），單個(gè)細(xì)胞直徑約 8-10μm，核質(zhì)比高（約 0.7），細(xì)胞核呈圓形，染色質(zhì)呈粗塊狀，可見 1-2 個(gè)核仁，核分裂象每 10 個(gè)高倍視野 5-6 個(gè)，胞質(zhì)少而嗜堿性，可見少量嗜天青顆粒。電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)富含游離核糖體，線粒體呈圓形或短桿狀，符合淋巴細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá) B 細(xì)胞標(biāo)志物 CD19（陽性率 98%）、CD20（陽性率 95%）和 IgM（膜結(jié)合型，陽性率 90%），低表達(dá) CD21（陽性率 30%）和 MHCⅡ 類分子（I-A?，陽性率 40%），不表達(dá) CD3（T 細(xì)胞標(biāo)志物）和 Gr-1（粒細(xì)胞標(biāo)志物），證實(shí)其未成熟 B 細(xì)胞特性，與骨髓中過渡期 B 細(xì)胞表型高度相似。
體外培養(yǎng)體系中，WEHI 231 細(xì)胞展現(xiàn)出du特的增殖與凋亡特性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基（添加 50μM 2 - 巰基乙醇），在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48 小時(shí)，倍增時(shí)間約 36 小時(shí)，顯著快于正常 B 細(xì)胞。其核心特征是對(duì) BCR 交聯(lián)誘導(dǎo)的凋亡高度敏感：經(jīng)抗 IgM 抗體處理后，6 小時(shí)出現(xiàn)明顯凋亡形態(tài)（染色質(zhì)凝聚、細(xì)胞膜皺縮），24 小時(shí)凋亡率達(dá) 70%，而成熟 B 細(xì)胞系僅 15%，這種特性模擬了未成熟 B 細(xì)胞在接觸自身抗原時(shí)的陰性選擇過程。細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中 48 小時(shí)凋亡率達(dá) 80%，添加 IL-4 可使凋亡率降至 30%，證實(shí)細(xì)胞因子對(duì)其存活的調(diào)控作用，與體內(nèi) B 細(xì)胞發(fā)育依賴細(xì)胞因子微環(huán)境的特點(diǎn)一致。軟瓊脂克隆形成率約 20%，連續(xù)傳代 40 次內(nèi)，IgM?表型及凋亡敏感性無明顯改變，凍存復(fù)蘇存活率超 90%，復(fù)蘇后 24 小時(shí)需更換培養(yǎng)基去除死細(xì)胞。
BCR 信號(hào)通路研究揭示其du特的調(diào)控模式。Western blot 分析顯示，基礎(chǔ)狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi) ERK 磷酸化水平較低，BCR 交聯(lián)后 5 分鐘 p-ERK 水平升高 6 倍，但持續(xù)時(shí)間短（30 分鐘后下降至基礎(chǔ)水平的 2 倍），與成熟 B 細(xì)胞的持續(xù)激活模式不同。下游鈣信號(hào)通路表現(xiàn)為短暫 Ca2?內(nèi)流（峰值在 2 分鐘，10 分鐘恢復(fù)基線），而成熟 B 細(xì)胞 Ca2?濃度可維持 30 分鐘以上。這種信號(hào)特征與細(xì)胞內(nèi) SHIP1 磷酸酶的高表達(dá)相關(guān)（是成熟 B 細(xì)胞的 4 倍），SHIP1 可快速終止 PI3K/Akt 通路激活（p-Akt 在 15 分鐘降至基礎(chǔ)水平），導(dǎo)致抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達(dá)不升高，最終引發(fā)凋亡。敲除 SHIP1 后，BCR 誘導(dǎo)的凋亡率下降至 25%，證實(shí)其在凋亡調(diào)控中的核心作用。
凋亡機(jī)制研究中，WEHI 231 細(xì)胞是解析線粒體依賴途徑的理想模型?？?IgM 處理后，細(xì)胞se素 c 從線粒體釋放至胞質(zhì)的量在 6 小時(shí)增加 5 倍，caspase-9 和 caspase-3 活性分別升高 8 倍和 10 倍，而 caspase-8 活性無明顯變化，證實(shí)其凋亡主要依賴內(nèi)源性途徑。Bax 蛋白在處理后發(fā)生構(gòu)象改變并向線粒體聚集（線粒體 Bax 含量增加 4 倍），Bcl-2/Bax 比值從 1.2 降至 0.3，這種平衡失調(diào)是線粒體膜電位崩潰的關(guān)鍵原因（JC-1 染色顯示膜電位下降 60%）。與其他凋亡模型相比，其凋亡過程不依賴死亡受體激活，信號(hào)通路更單純，適合研究線粒體通透性轉(zhuǎn)換的調(diào)控機(jī)制。
在 B 細(xì)胞耐受研究中，該細(xì)胞系模擬了自身反應(yīng)性 B 細(xì)胞的清除過程。當(dāng)用抗 IgM 抗體持續(xù)刺激時(shí)，細(xì)胞不僅發(fā)生凋亡，還表現(xiàn)出受體編輯現(xiàn)象：免疫球蛋白輕鏈基因 VJ 重組相關(guān)的 RAG1/2 表達(dá)上調(diào) 3 倍，新的輕鏈基因重排使部分細(xì)胞（約 10%）膜 IgM 表達(dá)消失，轉(zhuǎn)而表達(dá) IgG，這種表型轉(zhuǎn)換與骨髓中自身反應(yīng)性 B 細(xì)胞的受體編輯機(jī)制一致。共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示，樹突狀細(xì)胞分泌的 IL-10 可抑制受體編輯（RAG1/2 表達(dá)下降 50%），促進(jìn)凋亡，而 T 細(xì)胞來源的 CD40L 可逆轉(zhuǎn)這一過程（凋亡率下降至 20%），證實(shí)免疫微環(huán)境對(duì) B 細(xì)胞耐受的調(diào)控作用。
藥物篩選應(yīng)用中，WEHI 231 細(xì)胞被用于評(píng)估 B 細(xì)胞相關(guān)疾病的治療藥物?；谄鋵?duì) BCR 誘導(dǎo)凋亡的敏感性，可篩選調(diào)控 B 細(xì)胞存活的化合物，某新型 PI3Kδ 抑制劑處理后，BCR 誘導(dǎo)的凋亡率從 70% 提升至 90%，同時(shí)抑制細(xì)胞增殖（IC50 約 0.5μM），體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示該藥物可減少小鼠脾臟 B 細(xì)胞數(shù)量 30%，為 B 細(xì)胞淋巴瘤治療提供了候選分子。其對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性較低（地塞mi松 IC50 1μM），而對(duì)鈣調(diào)磷酸酶抑制劑敏感（環(huán)bao素 A IC50 0.1μM），這種差異反應(yīng)性可用于區(qū)分藥物作用靶點(diǎn)。
抗體生成研究中，該細(xì)胞系展現(xiàn)出du特的分泌特性。雖然細(xì)胞主要表達(dá)膜結(jié)合型 IgM，但經(jīng) LPS 和 IL-4 聯(lián)合刺激后，5% 的細(xì)胞可分泌 IgM（ELISA 檢測(cè)濃度達(dá) 50ng/mL?24h），同時(shí)發(fā)生部分分化（CD23 表達(dá)上調(diào)至 60%），但無法分化為漿細(xì)胞（不表達(dá) CD138），證實(shí)其未成熟狀態(tài)限制了終末分化?；虮磉_(dá)譜分析顯示，BLIMP1（漿細(xì)胞分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子）表達(dá)量僅為成熟 B 細(xì)胞的 1/5，過表達(dá) BLIMP1 可使 IgM 分泌量增加 3 倍，說明轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控是其分泌功能受限的主要原因。
在免疫調(diào)節(jié)研究中，WEHI 231 細(xì)胞與 T 細(xì)胞的相互作用為解析 B-T 細(xì)胞協(xié)作提供了模型。與 CD4?T 細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞可通過 CD40-CD40L 相互作用獲得存活信號(hào)（凋亡率下降 40%），同時(shí)上調(diào) CD80/CD86 表達(dá)（分別增加 3 倍和 2 倍），增強(qiáng)抗原提呈能力。T 細(xì)胞分泌的 IL-21 可進(jìn)一步促進(jìn)其增殖（增殖率增加 50%），這種協(xié)同效應(yīng)依賴完整的 T 細(xì)胞受體信號(hào)，阻斷 TCR 可使上述效應(yīng)消失，模擬了體內(nèi) B 細(xì)胞依賴 T 細(xì)胞輔助的活化過程。
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