來(lái)源與形態(tài)：CHO-K1 源自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO），通過(guò)單細(xì)胞克隆技術(shù)篩選獲得純度更高的亞系。體外培養(yǎng)時(shí)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞呈多邊形，排列緊密且邊界清晰，較野生型 CHO 細(xì)胞形態(tài)更均一。在 37℃、5% CO?的培養(yǎng)條件下，增殖速度穩(wěn)定，傳代周期約 2-3 天，可適應(yīng)貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)及無(wú)血清培養(yǎng)基體系，尤其適合高密度培養(yǎng)。

遺傳特征：保留 CHO 細(xì)胞的非整倍體核型（染色體數(shù)目約 20-22 條），但核型更穩(wěn)定，基因組背景清晰，無(wú)內(nèi)源性病毒序列。與 dhFr 缺陷型 CHO 細(xì)胞不同，CHO-K1 為原型細(xì)胞系，不攜帶營(yíng)養(yǎng)缺陷標(biāo)記，可自主合成核酸前體物質(zhì)，無(wú)需依賴外源性營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充。其基因組對(duì)外源基因的容納能力強(qiáng)，轉(zhuǎn)染后可通過(guò)抗性篩選快速獲得穩(wěn)定表達(dá)株，且長(zhǎng)期傳代后仍能維持目標(biāo)蛋白的表達(dá)穩(wěn)定性。

優(yōu)勢(shì)：培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，無(wú)需特殊營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，適合實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模研究與工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)；遺傳穩(wěn)定性高，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，被國(guó)際監(jiān)管機(jī)構(gòu)（如 FDA、EMA）認(rèn)可為生物藥生產(chǎn)的合規(guī)細(xì)胞系；對(duì)外源基因的兼容性強(qiáng)，可表達(dá)多種類型的重組蛋白，且表達(dá)量穩(wěn)定。

局限性：重組蛋白表達(dá)量通常低于 dhFr 缺陷型 CHO 細(xì)胞（需通過(guò)基因編輯或培養(yǎng)優(yōu)化提升產(chǎn)量）；部分復(fù)雜蛋白（如多亞基蛋白）的表達(dá)效率較低，可能受限于細(xì)胞自身的折疊與組裝能力；長(zhǎng)期懸浮培養(yǎng)可能出現(xiàn)細(xì)胞聚集體，影響蛋白純化效率。

培養(yǎng)條件：常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 或 MEM 培養(yǎng)基，添加青mei素 - 鏈mei素預(yù)防污染。若用于蛋白生產(chǎn)，可改用化學(xué)成分明確的無(wú)血清培養(yǎng)基，減少外源蛋白干擾。培養(yǎng)過(guò)程中需控制細(xì)胞密度（貼壁培養(yǎng)融合度不超過(guò) 85%），避免過(guò)度密集導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變或增殖停滯。

污染防控：貼壁細(xì)胞易受支原體、真菌污染，需定期通過(guò) PCR 或熒光染色檢測(cè)；凍存時(shí)使用含 10% DMSO 的凍存液，液氮保存可長(zhǎng)期維持活性，復(fù)蘇時(shí) 37℃快速解凍并離心去除 DMSO，降低細(xì)胞損傷風(fēng)險(xiǎn)。