BY-0775 U14小鼠子宮頸癌瘤株細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
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- 型號(hào) BY-0775
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- 更新時(shí)間 2025/7/30 14:10:34
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U14小鼠子宮頸癌瘤株細(xì)胞系
U14小鼠子宮頸癌瘤株細(xì)胞系源自 615 近交系小鼠的自發(fā)性子宮頸癌組織，是保留宮頸鱗狀上皮惡性轉(zhuǎn)化特征和宮頸間質(zhì)浸潤能力的經(jīng)典腫瘤模型，在宮頸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制、宮頸組織特異性侵襲及抗腫瘤藥物篩選研究中具有重要價(jià)值，為解析宮頸鱗癌的生物學(xué)行為提供了理想工具。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的宮頸癌細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細(xì)胞呈多邊形或梭形，貼壁生長時(shí)排列呈不規(guī)則片狀或巢狀，部分區(qū)域可見角化珠樣結(jié)構(gòu)，模擬宮頸鱗狀上皮的分化特征。細(xì)胞核呈圓形或不規(guī)則形，核質(zhì)比高，染色質(zhì)呈粗顆粒狀，可見 2-3 個(gè)明顯核仁，核分裂象多見（每 10 個(gè)高倍視野 8-10 個(gè)），胞質(zhì)較少，呈嗜堿性，部分細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見角質(zhì)顆粒，電鏡下可見細(xì)胞間橋粒連接減少，張力原纖維排列紊亂，符合鱗狀上皮源性腫瘤的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá)宮頸鱗狀上皮特異性標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白 17（CK17）和 p16INK4a，流式細(xì)胞術(shù)檢測陽性率分別達(dá) 92% 和 88%，同時(shí)表達(dá)宮頸癌相關(guān)抗原 SCC-Ag，陽性率達(dá) 80%，而腺上皮標(biāo)志物 CK7 表達(dá)陰性，證實(shí)其宮頸鱗狀上皮來源特性。
體外培養(yǎng)體系中，U14 細(xì)胞展現(xiàn)出穩(wěn)定的增殖能力與強(qiáng)侵襲潛能。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，添加 1% 谷an酰胺，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 60 小時(shí)，對數(shù)生長期細(xì)胞活力達(dá) 90% 以上，倍增時(shí)間約 40 小時(shí)。其顯著特點(diǎn)是對宮頸間質(zhì)的侵襲能力突出，Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)中，以鼠宮頸間質(zhì)基質(zhì)為屏障時(shí)，24 小時(shí)穿透細(xì)胞數(shù)是乳腺癌細(xì)胞系 MCF-7 的 1.6 倍，這種組織特異性侵襲與細(xì)胞高表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶 - 9（MMP-9）密切相關(guān)，酶譜分析顯示其活性較正常宮頸上皮細(xì)胞高 5 倍，可高效降解宮頸間質(zhì)的膠原蛋白成分。軟瓊脂克隆形成率達(dá) 35%，克隆形態(tài)呈不規(guī)則團(tuán)塊狀，邊緣有偽足樣突起，反映其侵襲性生長特征。凍存復(fù)蘇性能良好，液氮凍存后復(fù)蘇存活率超 85%，連續(xù)傳代 50 次后，SCC-Ag 表達(dá)及侵襲能力無明顯衰減，保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。
U14 細(xì)胞的核心價(jià)值體現(xiàn)在其對宮頸癌浸潤過程的精準(zhǔn)模擬。在動(dòng)物模型中，將 1×10?個(gè)細(xì)胞接種于 615 小鼠宮頸黏膜下層，12 天形成原發(fā)瘤，20 天腫瘤穿透基底膜，28 天浸潤至宮頸肌層，成瘤率 100%，病理切片顯示腫瘤組織保留 CK17 表達(dá)，呈浸潤性生長，破壞宮頸腺體結(jié)構(gòu)，與人類宮頸鱗癌的浸潤模式高度一致。通過熒光標(biāo)記追蹤發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞首先破壞宮頸黏膜上皮完整性，沿宮頸腺體間隙侵襲，逐步穿透固有層和肌層，這一過程依賴細(xì)胞分泌的透明質(zhì)酸酶，可降解宮頸間質(zhì)中的透明質(zhì)酸屏障，透明質(zhì)酸酶抑制劑處理可使浸潤深度減少 55%。
在發(fā)病機(jī)制研究中，該細(xì)胞系揭示了宮頸癌te有的分子異常。基因測序顯示，細(xì)胞存在 HPV16 E6/E7 整合，導(dǎo)致 p53 蛋白降解增加和 Rb 蛋白功能失活，Western blot 檢測顯示 p53 表達(dá)量較正常宮頸上皮細(xì)胞低 60%，Rb 磷酸化水平高 3 倍，使細(xì)胞周期檢查點(diǎn)失控，S 期比例增加 30%。同時(shí)，細(xì)胞中 PI3K/Akt 信號(hào)通路異常激活，Akt 磷酸化水平高 4 倍，可促進(jìn)抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達(dá)，Akt 抑制劑處理可使細(xì)胞增殖率下降 50%，凋亡率上升 35%。與其他婦科腫瘤相比，其表皮生長因子受體（EGFR）表達(dá)更為顯著，蛋白水平高 3 倍，抑制 EGFR 可使細(xì)胞克隆形成率下降 65%，證實(shí)其在腫瘤增殖中的作用。
在轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中，U14 細(xì)胞展現(xiàn)出以淋巴轉(zhuǎn)移為主的特性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，35 天盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達(dá) 70%，腹腔種植轉(zhuǎn)移率為 45%，血行轉(zhuǎn)移較少見（肺轉(zhuǎn)移率 20%），這種轉(zhuǎn)移模式與細(xì)胞高表達(dá) CC 趨化因子受體 7（CCR7）相關(guān)，該受體可與淋巴結(jié)中的 CCL21 結(jié)合，流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示其與淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附率達(dá) 45%，CCR7 抗體處理可使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率下降 60%?；蛐酒治鲲@示，轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞中與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)的 Twist 和 Snail 表達(dá)上調(diào)，E - 鈣粘蛋白表達(dá)下降 50%，使細(xì)胞獲得遷移能力，沉默 Twist 后，細(xì)胞遷移率下降 55%。
在藥物篩選應(yīng)用中，U14 細(xì)胞是評估宮頸癌治療藥物的有效工具。體外藥敏實(shí)驗(yàn)顯示，細(xì)胞對shun鉑敏感性較高，半數(shù)抑制濃度（IC50）約 1.5μM，聯(lián)合使用 EGFR 抑制劑后，IC50 降至 0.6μM，協(xié)同指數(shù)為 0.6，證實(shí)聯(lián)合用藥的增效作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，該聯(lián)合方案可使 615 小鼠宮頸癌原發(fā)瘤體積縮小 75%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率從 70% 降至 20%，療效優(yōu)于單藥治療?；谄?HPV 相關(guān)特性，還可用于 HPV 相關(guān)宮頸癌的靶向藥物研究，搭載 E6/E7 siRNA 的納米藥物對 U14 細(xì)胞的抑制率達(dá) 70%，顯著降低腫瘤組織中 E6/E7 的表達(dá)量。
在腫瘤微環(huán)境研究中，U14 細(xì)胞與宮頸成纖維細(xì)胞的相互作用為解析腫瘤進(jìn)展提供了線索。共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示，成纖維細(xì)胞分泌的轉(zhuǎn)化生長因子 -β（TGF-β）可激活腫瘤細(xì)胞的 Smad 通路，使 MMP-9 表達(dá)上調(diào) 2.5 倍，侵襲能力增強(qiáng) 65%，TGF-β 中和抗體可阻斷這種促進(jìn)作用。在缺氧微環(huán)境（1% O?）中，細(xì)胞 HIF-1α 表達(dá)上調(diào)，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）分泌增加，促進(jìn)腫瘤血管生成，VEGF 抗體處理可使腫瘤微血管密度減少 50%，為針對腫瘤微環(huán)境的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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