BY-0124 A-375 A375人惡性黑色素瘤細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0124
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- 更新時間 2025/8/1 11:58:55
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A-375 [A375]人惡性黑色素瘤細胞系
A-375 [A375]人惡性黑色素瘤細胞系是研究黑色素瘤的經(jīng)典模型，以高侵襲轉移能力、BRAF 基因突變及對hua療藥物的典型響應性為核心特征，在黑色素瘤發(fā)生機制、靶向治療研發(fā)及耐藥性研究中占據(jù)重要地位，為解析黑色素瘤的惡性進展與治療策略優(yōu)化提供了可靠實驗載體。
來源與背景：該細胞系于 1974 年從 54 歲男性患者的皮膚惡性黑色素瘤病灶分離建立，屬于 BRAF 突變型黑色素瘤模型。與其他黑色素瘤細胞系相比，其源自皮膚原發(fā)灶，更能反映黑色素瘤早期侵襲皮膚組織的生物學特性，尤其適合研究黑色素瘤的局部浸潤機制。作為首ge被證實存在 BRAF V600E 突變的黑色素瘤細胞系，長期傳代后仍穩(wěn)定保持該突變及高侵襲特性，填bu了 BRAF 驅動型黑色素瘤研究模型的空白，至今仍是國際黑色素瘤靶向藥物篩選的標準參照之一。
細胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)上皮樣與梭形細胞混合特征，貼壁生長且排列無極性，部分區(qū)域可見細胞聚集現(xiàn)象，細胞質豐富，含少量黑色素顆粒，細胞核大而不規(guī)則，核仁明顯，核質比約 1:1.2，具有黑色素瘤細胞的典型惡性形態(tài)。核心特性體現(xiàn)為BRAF 基因突變，攜帶 BRAF V600E 熱點突變，導致 MAPK 通路持續(xù)激活，該突變與 50% 的 cutaneous 黑色素瘤患者一致；強侵襲轉移能力，體外 Transwell 實驗中穿透基質膜的細胞數(shù)是正常黑色素細胞的 8-10 倍，裸鼠皮下接種后不僅形成原發(fā)瘤，還可通過淋巴道轉移至區(qū)域淋巴結，轉移率達 70%，高于 SK-MEL-28 細胞系；增殖與成瘤能力，體外培養(yǎng)倍增時間約 24-36 小時，克隆形成率約 70%，裸鼠成瘤率 100%，2 周即可形成可測量腫瘤，生長速度快于 M14 細胞系。傳代時采用常規(guī)消化液處理，因細胞貼壁程度中等，消化時間控制在 2-3 分鐘，傳代比例 1:4-1:6，連續(xù)傳代 50 次后仍保持 BRAF 突變及侵襲特性，但黑色素合成能力可能略有下降。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 抗菌混合液以維持細胞活性。培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度，每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基，細胞密度維持在 20%-80% 之間，過度匯合會導致細胞形態(tài)改變及 BRAF 表達下調 10%-15%。與其他腫瘤細胞系相比，其對血清質量較敏感，低質量血清可使細胞侵襲能力下降 20%，傳代時消化后需用含血清培養(yǎng)基終止反應，以保護細胞表面的侵襲相關受體，凍存液推薦含 10% DMSO 的胎牛血清，復蘇后存活率可達 85% 以上，復蘇后 24 小時貼壁率超過 90%，細胞功能恢復正常。
檢測鑒定：經(jīng)微生物篩查，無支原體、細菌、真菌及常見病毒污染，符合實驗細胞質量標準。免疫細胞化學檢測顯示，S-100 蛋白、HMB45 及 Melan-A 呈陽性表達，其中 HMB45 陽性率超過 80%，符合黑色素瘤細胞的分子表型?；驕y序證實存在 BRAF V600E 突變，Western blot 檢測顯示磷酸化 ERK1/2 水平顯著升高，證實 MAPK 通路持續(xù)激活。染色體核型分析呈現(xiàn)亞二倍體核型，存在 7 號染色體三體、9 號染色體短臂缺失等異常，與 60% 的黑色素瘤患者遺傳學改變吻合。
應用領域：在機制研究中，該細胞系被用于揭示 BRAF V600E 驅動黑色素瘤發(fā)生的分子機制，研究發(fā)現(xiàn)該突變通過激活下游 c-Myc、Cyclin D1 等靶基因促進細胞周期進展，同時上調 MMP-2、MMP-9 等基質金屬蛋白酶增強侵襲能力，為理解 “增殖 - 侵襲” 協(xié)同作用提供了依據(jù)。在靶向治療研究中，是 BRAF 抑制劑（如 vemurafenib）療效評估的常用模型，其對 BRAF 抑制劑的敏感性高于 NRAS 突變型細胞系，IC50 值約為 0.5μM，通過該細胞系發(fā)現(xiàn)長期使用 BRAF 抑制劑可誘發(fā) NRAS 突變導致耐藥，推動了 “BRAF 抑制劑 + MEK 抑制劑” 聯(lián)合方案的臨床應用。在藥物篩選領域，因其對hua療藥物的典型響應性，被用于篩選新型黑色素瘤治療藥物，近期研究發(fā)現(xiàn)新型 HDAC 抑制劑與 BRAF 抑制劑聯(lián)用可顯著提高抑制效果，協(xié)同指數(shù)達 0.4。此外，該細胞系可用于研究腫瘤微環(huán)境的影響，與腫瘤相關巨噬細胞共培養(yǎng)后，其侵襲能力提升 40%，證實巨噬細胞在黑色素瘤進展中的促進作用，為聯(lián)合靶向腫瘤微環(huán)境提供實驗基礎。
與其他黑色素瘤細胞系（如 SK-MEL-5）相比，A-375 細胞系的優(yōu)勢在于其典型的 BRAF V600E 突變及強侵襲轉移能力，能更真實地模擬臨床中最常見的 BRAF 突變型黑色素瘤的特征，尤其適合研究該亞型黑色素瘤的發(fā)病機制及靶向治療策略，持續(xù)為黑色素瘤的精準診療提供關鍵實驗支撐。
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