BY-0081 T84人結(jié)直腸癌細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0081
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- 更新時(shí)間 2025/8/3 16:32:48
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T84人結(jié)直腸癌細(xì)胞系
T84人結(jié)直腸癌細(xì)胞系是研究結(jié)直腸癌及腸屏障功能的重要模型,因具備典型的腸上皮細(xì)胞極性和穩(wěn)定的屏障特性,在結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制、腸黏膜屏障功能及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,為解析結(jié)直腸癌的 “惡性增殖 - 屏障破壞” 雙重特征提供了可靠工具。
來源與背景:該細(xì)胞系于 1977 年從一名 61 歲男性結(jié)直腸癌患者的肺轉(zhuǎn)移灶中分離建立,雖源自轉(zhuǎn)移灶,但保留了豐富的腸上皮細(xì)胞特征。與其他結(jié)直腸癌細(xì)胞系(如 Caco-2)相比,其更貼近臨床結(jié)直腸癌的上皮表型,尤其適合研究結(jié)直腸癌對腸屏障功能的影響,為探索 “腫瘤細(xì)胞 - 腸黏膜微環(huán)境相互作用” 提供了理想樣本,填bu了結(jié)直腸癌與腸屏障關(guān)聯(lián)研究模型的空白。其明確的轉(zhuǎn)移來源和長期傳代穩(wěn)定性,使其成為結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移與腸屏障功能研究的重要橋梁。
細(xì)胞特性:形態(tài)上呈柱狀上皮樣,貼壁生長,可形成連續(xù)的單層細(xì)胞,細(xì)胞排列緊密,呈極性分布,頂端可見微絨毛結(jié)構(gòu),細(xì)胞質(zhì)豐富,細(xì)胞核呈橢圓形,位于細(xì)胞基底部,具有腸上皮細(xì)胞的典型形態(tài)特征。核心特性為強(qiáng)極性與屏障功能,體外培養(yǎng)可形成高電阻值的單層細(xì)胞屏障,跨上皮電阻(TEER)可達(dá) 1000-1500Ω?cm2,顯著高于多數(shù)結(jié)直腸癌細(xì)胞系,緊密連接蛋白(如 occludin、claudin-1)表達(dá)豐富,能有效限制溶質(zhì)自由通過,模擬正常腸黏膜的屏障功能;腸上皮標(biāo)志物表達(dá),高表達(dá)細(xì)胞角蛋白 20(CK20)、黏蛋白 1(MUC1),部分表達(dá)絨毛蛋白(villin),符合結(jié)腸上皮細(xì)胞的分子表型;中等增殖與侵襲能力,體外培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞倍增時(shí)間約 72-80 小時(shí),克隆形成率約 35%,低于高度惡性的結(jié)直腸癌細(xì)胞系(如 HCT116),Transwell 實(shí)驗(yàn)中侵襲能力中等,能分泌少量基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-7),模擬結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程中的侵襲特性。傳代時(shí)采用常規(guī)消化液處理,傳代比例 1:2-1:3,因細(xì)胞連接緊密,需適當(dāng)延長消化時(shí)間,連續(xù)傳代 50 次后仍保持極性和屏障功能,但 TEER 值可能下降 10%-15%。
培養(yǎng)條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 DMEM/Ham's F12 混合培養(yǎng)基,添加 2mM 谷an酰胺和 1% 抗菌混合液以維持細(xì)胞活性。培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度,每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基,細(xì)胞密度維持在 50%-80% 之間,過度匯合會影響細(xì)胞極性。與其他腫瘤細(xì)胞系不同,其對培養(yǎng)表面的適應(yīng)性較強(qiáng),在膠原包被的培養(yǎng)板上生長更佳,能增強(qiáng)細(xì)胞極性和屏障功能。傳代時(shí)用常規(guī)消化液處理 5-6 分鐘,輕柔吹打避免損傷細(xì)胞極性結(jié)構(gòu),凍存液推薦含 10% DMSO 的胎牛血清,復(fù)蘇后存活率可達(dá) 80% 以上,但屏障功能需在復(fù)蘇后 3-5 天才能wan全恢復(fù)。
檢測鑒定:經(jīng)微生物篩查,無支原體、細(xì)菌、真菌及常見病毒污染,符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。免疫熒光檢測顯示,緊密連接蛋白 occludin 在細(xì)胞頂端呈線性表達(dá),CK20 陽性,CK7 陰性,符合結(jié)腸上皮細(xì)胞的免疫表型特征??缟掀る娮铚y定證實(shí)其高 TEER 值,熒光素異硫氰酸酯(FITC)標(biāo)記的右旋糖酐通透性實(shí)驗(yàn)顯示其低通透性,驗(yàn)證其屏障功能。染色體核型分析呈現(xiàn)亞三倍體核型,存在 17 號染色體三體、8 號染色體缺失等異常,與臨床結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移患者的遺傳學(xué)改變部分吻合。功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)腫瘤壞死因子 -α(TNF-α)處理后,TEER 值顯著下降,緊密連接蛋白表達(dá)減少,模擬炎癥或腫瘤微環(huán)境對腸屏障的破壞;裸鼠腹腔接種后可侵襲腸壁組織,病理檢查可見腫瘤細(xì)胞破壞腸黏膜屏障,證實(shí)其體內(nèi)侵襲特性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在發(fā)病機(jī)制研究中,該細(xì)胞系常用于解析結(jié)直腸癌對腸屏障功能的影響,研究發(fā)現(xiàn)其分泌的某些細(xì)胞因子(如 IL-6)可降低自身及鄰近正常腸上皮細(xì)胞的 TEER 值,破壞緊密連接結(jié)構(gòu),為理解結(jié)直腸癌如何突破腸屏障提供了關(guān)鍵線索。在藥物轉(zhuǎn)運(yùn)研究中,是評估藥物經(jīng)腸吸收的常用模型,因其具備完整的屏障功能和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá),可用于研究藥物的跨上皮轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,如某些口服藥物通過該細(xì)胞系的轉(zhuǎn)運(yùn)效率與體內(nèi)吸收情況高度相關(guān),為藥物劑型優(yōu)化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在藥物篩選方面,適用于評估結(jié)直腸癌治療藥物對腸屏障功能的影響,通過檢測藥物對 TEER 值及緊密連接蛋白的影響,篩選既能抑制腫瘤生長又不破壞腸屏障的候選藥物,如某些靶向 EGFR 的抑制劑對其屏障功能影響較小。此外,該細(xì)胞系可用于研究結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移與腸黏膜免疫的相互作用,與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)可誘導(dǎo)其屏障功能下降,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲,為解析轉(zhuǎn)移微環(huán)境的形成機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
該細(xì)胞系的優(yōu)勢在于能穩(wěn)定維持腸上皮極性和屏障功能,為研究 “結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中腸屏障的動態(tài)變化” 提供了理想模型。通過與其他低屏障功能的結(jié)直腸癌細(xì)胞系的對比實(shí)驗(yàn),可清晰區(qū)分結(jié)直腸癌不同階段的屏障功能差異,為結(jié)直腸癌的早期診斷和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
總之,T84 人結(jié)直腸癌細(xì)胞系憑借其典型的腸上皮特征和穩(wěn)定的屏障功能,成為連接結(jié)直腸癌研究與腸屏障功能研究的重要工具,為解析結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制、開發(fā)新型治療藥物及保護(hù)腸屏障功能提供了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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