概念和原理

    凝膠遷移實驗是一種研究DNA結(jié)合蛋白質(zhì)和與其相應(yīng)的DNA序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA結(jié)臺蛋白質(zhì)，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白質(zhì)和特定的RNA序列的相互作用。這項技術(shù)是基于DNA/蛋白質(zhì)或RNA/蛋白質(zhì)復(fù)合體在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)中有不同遷移率的原理。通常將純化的蛋白質(zhì)或細胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)臺的探針，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與一條人工合成的特異的DNA或RNA結(jié)合后，其在PAGE中的遷移率將小于未結(jié)合核蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子的DNA，從而檢測到活化的與DNA或RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子。標(biāo)記的探針根據(jù)研究的結(jié)合蛋白質(zhì)的不同，可以是雙鏈或者是單鏈。

  當(dāng)檢測如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)，可用純化蛋白質(zhì)，部分純化蛋白質(zhì)或核蛋白質(zhì)提取物。在檢測RNA結(jié)合蛋白質(zhì)時，依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白質(zhì)的位置，可用純化或部分純化的蛋白質(zhì)，也可用細胞核或胞質(zhì)提取物。競爭實驗中采用含蛋白質(zhì)結(jié)臺序列的DNA或RNA -片段和寡核苷酸片段（特異）和其它非特異片段，來確定DNA或RNA結(jié)合蛋白質(zhì)的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下，依據(jù)復(fù)合物的特點和強度來確定特異結(jié)合。

科研和臨床應(yīng)用

研究DNA結(jié)合蛋白質(zhì)和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列間的相互作用；

DNA定性和定量分析；

研究RNA結(jié)合蛋白質(zhì)和特定的RNA序列的相互作用。

標(biāo)本采集、保存、運輸

組織樣品：新鮮組織放入液氮或-80℃保存，組織不少于200mg，冷凍運輸；

培養(yǎng)細胞：通過細胞計數(shù)取不少于2×106個細胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白質(zhì)保護劑，混勻后保存于-80℃冰箱，冷凍運輸；

血液細胞標(biāo)本：以抗凝管保存全血或以淋巴細胞分離液分離單核細胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白質(zhì)保護劑，混勻后保存于-80℃保存，避免反復(fù)凍融，冷凍運輸；

血清或細胞培養(yǎng)液標(biāo)本：離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管，4℃可保存15-20天，-80℃可*保存，避免反復(fù)凍融，冷凍運輸。

客戶須知

客戶告知實驗分組、編號及背景設(shè)計資料，有具體要求請事先說明；

抗體：自備抗體，如無則由本公司代購；

探針：自備探針，如無則由本公司代為設(shè)計合成。

報告形式

圖片報告形式
                      
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