BY-0972 L-bFGF-5小鼠淋巴瘤細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0972
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- 更新時(shí)間 2025/8/7 14:35:20
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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L-bFGF-5小鼠淋巴瘤細(xì)胞系
L-bFGF-5小鼠淋巴瘤細(xì)胞系，是研究腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控、生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)及淋巴瘤發(fā)生機(jī)制的重要模型，以穩(wěn)定分泌堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）、懸浮生長(zhǎng)特性及腫瘤微環(huán)境交互作用的研究?jī)r(jià)值為核心優(yōu)勢(shì)，在腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，為解析淋巴瘤細(xì)胞的惡性增殖機(jī)制及相關(guān)治療靶點(diǎn)提供了可靠實(shí)驗(yàn)工具。
來(lái)源與背景：該細(xì)胞系源自經(jīng)基因修飾的小鼠 T 淋巴細(xì)胞淋巴瘤，是通過(guò)將 bFGF-5 基因?qū)胗H本淋巴瘤細(xì)胞系后篩選獲得的穩(wěn)定表達(dá)株。bFGF 作為一種多功能生長(zhǎng)因子，在正常組織中參與細(xì)胞增殖、分化調(diào)控，而在腫瘤微環(huán)境中常被異常高表達(dá)，通過(guò)自分泌或旁分泌方式促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成及侵襲轉(zhuǎn)移。L-bFGF-5 細(xì)胞系的建立，模擬了淋巴瘤細(xì)胞中 bFGF 異常高表達(dá)的病理狀態(tài)，填bu了 bFGF 介導(dǎo)的淋巴瘤惡性進(jìn)展研究模型的空白，因能穩(wěn)定分泌 bFGF 且可通過(guò)調(diào)控其表達(dá)水平觀察腫瘤表型變化，成為研究 bFGF 信號(hào)通路與淋巴瘤關(guān)系的經(jīng)典模型，相關(guān)研究文獻(xiàn)已超千篇。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈圓形或橢圓形，直徑約 9-11μm，懸浮生長(zhǎng)，無(wú)貼壁能力，單個(gè)或呈小簇狀分布，細(xì)胞質(zhì)豐富，可見(jiàn)少量顆粒，細(xì)胞核大且核仁明顯，7% 細(xì)胞可見(jiàn)分裂相，體現(xiàn)淋巴瘤細(xì)胞的惡性增殖特征。核心特性突出：bFGF 分泌高效穩(wěn)定，分泌量達(dá) 35-45pg/10?細(xì)胞 / 24h，是親本細(xì)胞系的 8-10 倍，且連續(xù)傳代 60 次后分泌能力無(wú)明顯下降，細(xì)胞培養(yǎng)液中 bFGF 濃度穩(wěn)定在 25ng/ml 左右；自分泌增殖依賴，通過(guò)中和抗體阻斷 bFGF 信號(hào)后，細(xì)胞增殖速率下降 60%，凋亡率升高至 35%，證實(shí)其惡性增殖依賴 bFGF 自分泌環(huán)路；信號(hào)通路激活狀態(tài)，高表達(dá) bFGF 受體（FGFR1/2），bFGF 刺激后 10 分鐘內(nèi) ERK1/2 和 PI3K/Akt 磷酸化水平升高 6 倍，下游 Cyclin D1 表達(dá)量增加 3 倍，wan美模擬 bFGF 介導(dǎo)的促增殖信號(hào)傳導(dǎo)。傳代時(shí)直接收集細(xì)胞懸液，按 1:5-1:7 比例稀釋接種，細(xì)胞密度維持在 3×10?-1.5×10?個(gè) /ml，過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力下降 25%。
培養(yǎng)條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗，37℃、5% CO?飽和濕度環(huán)境。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn)：生長(zhǎng)因子調(diào)控，無(wú)需額外添加外源性 bFGF 即可維持細(xì)胞正常增殖，若需增強(qiáng) bFGF 分泌，可在培養(yǎng)基中添加 100nM 佛波酯，使分泌量提升 40%；血清質(zhì)量影響，需使用低內(nèi)毒素血清（<0.2EU/ml），劣質(zhì)血清會(huì)非特異性激活 MAPK 通路，導(dǎo)致細(xì)胞增殖異常，存活率下降 30%；污染防控，因懸浮生長(zhǎng)特性，需每周檢測(cè)支原體，污染后采用專用清除試劑處理，恢復(fù)率可達(dá) 88%。凍存采用含 10% DMSO 和 20% 胎牛血清的凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 48 小時(shí)存活率達(dá) 85%，bFGF 分泌能力保持穩(wěn)定。
檢測(cè)鑒定：微生物檢測(cè)無(wú)細(xì)菌、真菌及支原體污染，符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示 CD3?、CD4?，證實(shí) T 淋巴細(xì)胞來(lái)源；ELISA 檢測(cè)證實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液中 bFGF 濃度顯著高于親本細(xì)胞系，Western blot 顯示 bFGF 蛋白表達(dá)量升高 8 倍，且 FGFR 磷酸化水平持續(xù)激活。功能驗(yàn)證中，bFGF 中和實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞集落形成數(shù)減少 55%，Transwell 實(shí)驗(yàn)證實(shí)其侵襲能力下降 40%，驗(yàn)證 bFGF 對(duì)細(xì)胞惡性表型的調(diào)控作用。染色體核型為近三倍體（眾數(shù) 58-62），存在 8 號(hào)染色體三體（含 bFGF-5 基因插入位點(diǎn)），與基因修飾后的遺傳學(xué)特征一致。
應(yīng)用領(lǐng)域：在腫瘤增殖機(jī)制研究中，通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn) bFGF 通過(guò)激活 FGFR-PI3K/Akt 通路維持淋巴瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖，抑制 PI3K 活性可使細(xì)胞周期停滯在 G1 期，比例從 30% 升至 65%，為淋巴瘤的靶向治療提供關(guān)鍵機(jī)制依據(jù)。在腫瘤微環(huán)境研究中，利用其分泌 bFGF 的特性，證實(shí)該因子可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和管腔形成，培養(yǎng)液上清可使內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成數(shù)增加 2.3 倍，揭示淋巴瘤血管生成的旁分泌調(diào)控機(jī)制。在藥物篩選方面，作為 bFGF/FGFR 通路抑制劑的評(píng)估模型，新型 FGFR 抑制劑可使 L-bFGF-5 細(xì)胞增殖抑制率達(dá) 70%，IC50 值穩(wěn)定在 0.8μM 左右。此外，該細(xì)胞系可用于研究腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期暴露于低劑量抑制劑可誘導(dǎo) bFGF 分泌量升高 2 倍，通過(guò)負(fù)反饋增強(qiáng)通路活性，為克服耐藥提供新策略。
與其他淋巴瘤細(xì)胞系相比，L-bFGF-5 細(xì)胞系的優(yōu)勢(shì)在于其 bFGF 分泌的高穩(wěn)定性、自分泌增殖環(huán)路的明確性及信號(hào)通路研究的便捷性，bFGF 依賴的增殖抑制率遠(yuǎn)高于普通淋巴瘤細(xì)胞系（如 EL4，約 40%）。通過(guò)該細(xì)胞系的研究，已闡明 8 個(gè) bFGF 下游調(diào)控基因，推動(dòng) 3 種 FGFR 抑制劑進(jìn)入臨床前試驗(yàn)，為淋巴瘤的機(jī)制研究及治療策略開(kāi)發(fā)提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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