來(lái)源與馴化：該細(xì)胞系源自 CHO-S 親本株，經(jīng)無(wú)血清培養(yǎng)基適應(yīng)性馴化與單細(xì)胞克隆篩選獲得。通過(guò)在 125mL 搖瓶中連續(xù)傳代 60 次，逐步提高轉(zhuǎn)速（從 100rpm 增至 140rpm）并降低血清濃度（從 5% 降至 0%），最終篩選出第 4 株懸浮性能zuiyou的克?。ā癝-4” 標(biāo)識(shí)篩選批次與編號(hào)）。馴化過(guò)程未引入基因編輯，僅通過(guò)表型篩選實(shí)現(xiàn)，確保細(xì)胞遺傳背景的穩(wěn)定性，全基因組測(cè)序顯示與 CHO-S 親本相似度＞99.9%。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，懸浮生長(zhǎng)時(shí)呈圓形或短梭形，形成直徑 15-30μm 的均一聚集體（聚集體比例＜10%），顯著優(yōu)于普通 CHO-S（聚集體比例 25%-30%）。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-30 小時(shí)，較親本縮短 4-6 小時(shí)，無(wú)血清懸浮培養(yǎng)密度可達(dá) 1.8×10?個(gè) /mL（流加培養(yǎng)），活率長(zhǎng)期維持在 90% 以上，傳代 150 次以上生長(zhǎng)性能無(wú)明顯衰減，凍存復(fù)蘇后存活率超 92%。

功能特征：核心優(yōu)勢(shì)在于蛋白表達(dá)與懸浮適應(yīng)性的協(xié)同優(yōu)化：轉(zhuǎn)染外源基因后，重組蛋白表達(dá)量達(dá) 8-12g/L（流加培養(yǎng)），較普通 CHO-S 提升 30%-50%，且產(chǎn)物均一性高（聚合體比例＜2%）。其分泌途徑更高效，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物 GRP78 表達(dá)量較親本降低 40%，表明蛋白折疊與分泌能力增強(qiáng)；同時(shí)，對(duì)剪切力耐受性顯著提升（可耐受 160rpm 攪拌速率），為生物反應(yīng)器放大提供便利。

懸浮種子培養(yǎng)：

流加培養(yǎng)工藝：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞（密度 6-8×10?個(gè) /mL，活率＞95%），1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（90% 無(wú)血清培養(yǎng)基 + 10% DMSO）重懸至 1×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 7 年以上，復(fù)蘇后無(wú)需適應(yīng)即可直接懸浮培養(yǎng)。

優(yōu)勢(shì)：懸浮生長(zhǎng)性能優(yōu)異，聚集體少且均一度高；無(wú)血清適應(yīng)能力強(qiáng)，可直接放大至數(shù)千升反應(yīng)器；重組蛋白表達(dá)量高（8-12g/L）且穩(wěn)定性好；對(duì)剪切力與工藝波動(dòng)耐受性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)；培養(yǎng)周期短（10-14 天），生產(chǎn)效率高。

局限性：對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分敏感，需使用高質(zhì)量無(wú)血清培養(yǎng)基（成本較高）；高細(xì)胞密度下易積累乳酸（＞3g/L 時(shí)抑制生長(zhǎng)），需優(yōu)化流加策略；部分復(fù)雜糖蛋白（如含多天線糖型）的糖基化完整性略低于貼壁 CHO 細(xì)胞。