植物過氧化氫酶（CAT）酶聯(lián)免疫試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關(guān)樣本中過氧化氫酶（CAT）活性。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物過氧化氫酶（CAT）水平。用純化的植物過氧化氫酶（CAT）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化氫酶（CAT），再與 HRP 標記的過氧化氫酶（CAT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物過氧化氫酶（CAT）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中植物過氧化氫酶（CAT）活性濃度。

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30分鐘。

4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用 

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。 

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。 

操作程序總結(jié)：  

 計算

 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。

 注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值 大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計 算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。 

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

 保存條件及有效期 

1．試劑盒保存：；2-8℃。 

2．有效期：6個月