DMEM/F12 無(wú)酚紅培養(yǎng)基

DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。

培養(yǎng)基主要成份表

含有（＋）

（+）   D-葡萄糖

（+）   丙酮酸鈉

不含（－）

（－）  HEPES

（－）   酚 紅

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。

1）復(fù)蘇DMEM/F12：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查DMEM/F12密度。

2）細(xì)胞傳代：如果DMEM/F12密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗DMEM/F12 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若DMEM/F12大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待DMEM/F12生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

COLO 205人結(jié)腸癌細(xì)胞 COLO 205 human colon cancer cells 1640+10% FBS	細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白140抗體
電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白脫氫酶抗體	VWCE抗體
NK細(xì)胞表面抑制性受體CD94抗體	乙肝病毒pre S1/S2蛋白抗體
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端）	清道夫脫帽酶/熱休克蛋白1抗體
類皰疹病毒8抗體/皰疹病毒8型	分子生物鐘調(diào)控蛋白NOC抗體
草酰琥珀酸脫羧酶α抗體	人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞，MCF7細(xì)胞 PT67(小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞)	HPAEC Pellet 人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 心肌細(xì)胞生長(zhǎng)添加物CMGS
9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框79抗體	NHEK.f pooled Pellet 正常人表皮角質(zhì)細(xì)胞團(tuán)塊(少年者，混合來(lái)源) > 1 mio.cells 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基ECM
鉀通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體	Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4B	人腦瘤細(xì)胞;SF767
泌乳素受體抗體	A673(人橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
鐵螯合酶抗體	DMEM/F12 無(wú)酚紅培養(yǎng)基Promocell C-22111 Endothelial Cell GrowthMedium 2 KIT, 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基2型套裝 500ml
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106 肺腺癌細(xì)胞，LTEP-a-2細(xì)胞 MSCS細(xì)胞，猴的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞	VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
VEGFA Others Human 人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)	CL-0443SK-N-MC(人上皮瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

1.使用DMEM/F12時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。

2.本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無(wú)特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本DMEM/F12的優(yōu)良使用效果，不宜將其長(zhǎng)時(shí)間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

4.所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。

5.本產(chǎn)品只供進(jìn)一步科研使用，不可應(yīng)用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后，可能會(huì)有少量絮狀物析出，不影響DMEM/F12正常使用。