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化工儀器網>產品展廳>試劑標物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學用試劑> PCR產物純化回收試劑盒

PCR產物純化回收試劑盒

參考價 624.00-1216.80
具體成交價以合同協(xié)議為準
規(guī)格
100次624.00元15 盒可售
100 次×21216.80元15 盒可售

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上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。

上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。

公司秉承“專注品質、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務”的企業(yè)文化積極參與生物領域的技術創(chuàng)新和技術服務,力求為我國科研事業(yè)更好的,更專業(yè)的服務!

公司售后服務宗旨:有質量問題可申請退換,有技術疑問可隨時給于解答,一對一的客服服務,客戶的需求也是我們不斷的更新服務。





elisa試劑盒,細胞,菌種,科研抗體,標準品

供貨周期 現貨 規(guī)格 100次、100 次×2
貨號 A-Hc2024 應用領域 化工
主要用途 僅供科研研究實驗

商品屬性:

產品名稱

規(guī)格

貨號

PCR產物純化回收試劑盒

100次、100 次×2

A-Hc2024

QQ截圖20240110094643.jpg

保存條件:本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

產品介紹:

在高離序鹽存在的情況下,DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內的硅基質膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈DNA從硅基質膜上洗脫。

產品特點:

1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。

2.使用了優(yōu)質結合液,不含傳統(tǒng)結合液的碘鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。

3.結合液調制成為了黃顏色,便于監(jiān)測pH值變化從而達到最佳結合效果,大大提高回收效率。

4.簡單快速、使用方便。

自備試劑:無水乙醇

PCR基本步驟及注意事項?

一、實驗原理

PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環(huán)境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產生出靶DNA區(qū)段的指數加倍。

在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環(huán)數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節(jié)循環(huán)次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

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PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

沒有ct

檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

1、循環(huán)數不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)

ct值過晚

在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。





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