ELISA檢測有多種樣式，有間接法ELISA檢測，夾心法ELISA檢測，競爭法ELISA檢測等，不同的ELISA檢測有不同的流程以及對樣品有不同的要求。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

間接法ELISA檢測：

　　用特異性抗原包被固相載體，加入待測的抗體樣品反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)底物顯色后測定。間接法ELISA需要客戶提供待檢測樣本和包被用的抗原。

實驗流程:

　　1. 將抗原吸附于固相載體表面；

　　2. 加待檢抗體，形成抗原-抗體復(fù)合物；

　　3. 加酶標(biāo)抗體（抗抗體）；

　　4. 加入底物；

　　5. 結(jié)果判定：有色產(chǎn)物的生成量＝抗體量。

夾心法ELISA檢測：

　　用*抗原或抗體包被固相載體，加入待測的抗體或抗原反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)的第二抗原或抗體，經(jīng)底物顯色后測定，即可計算出待測抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原，如蛋白等，不適用于多肽等半抗原。夾心法ELISA需要客戶提供待檢測標(biāo)本和成對抗原或抗體（亦可由我們購買或制備抗體）。

實驗流程:

　　1. 將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)；

　　2. 加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時問，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物；

　　3. 加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合；

　　4. 加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。

競爭法ELISA檢測：

　　用特異性抗體包被固相載體，同時加入酶標(biāo)抗原和待測抗原的混合物樣本，待測抗原將與酶標(biāo)抗原競爭與固相上抗體結(jié)合。經(jīng)底物顯色后測定，計算兩組數(shù)值之差即可推出待測抗原的量。此方法常用于測定小分子抗原。競爭法ELISA需要客戶提供待檢測標(biāo)本、包被抗體和酶標(biāo)抗原（亦可由我們購買或制備抗原或抗體）。

實驗流程:

　　1. 將抗體吸附在固相載體表面；

　　2. 加入酶標(biāo)抗原和待測抗原；

　　3. 加入底物；

　　4. 結(jié)果判定：對照孔與樣品孔有色產(chǎn)物的生成量的差與未知抗原的量成負相關(guān)。

樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時，樣本收集后應(yīng)立即-20度保存，若長期保存應(yīng)-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

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