41102ES Lentiviral Packaging Kit
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 41102ES
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/16 13:01:05
- 訪問次數(shù) 874
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進化技術(shù)為驅(qū)動，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術(shù)開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細胞分析系列、細胞培養(yǎng)系列、細胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標局核準的注冊商標權(quán)37項以及4項境外注冊商標，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術(shù)開發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設(shè)運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實驗室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻力量。
分子生物學(xué)試劑，細胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 41102ES |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
翌圣慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)?；旌衔铮↙entiviral Mix）、表達eGFP蛋白的對照質(zhì)粒和高效轉(zhuǎn)染試劑（HG TransgeneTM Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒，且具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內(nèi)即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高的優(yōu)勢，可應(yīng)用于針對不同基因和藥物靶標的臨床前細胞學(xué)實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。
產(chǎn)品組分
| 類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 儲存 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | ||
| 41102ES10（10T） | 41102ES20（20T） | 41102ES40（40T） | ||||
| Part Ⅰ | 41102-A | Lentiviral Mix(1 μg/μL) | -25~-15℃ | 100 μL | 200 μL | 400 μL |
| 41102-C | eGFP 對照質(zhì)粒（Amp+） | -25~-15℃ | 1.5 μg | 1.5 μg | 1.5 μg | |
| Part Ⅱ | 41102-B | HG TransgeneTM Reagent | 2~8℃ | 0.6 mL | 1.2 mL | 2×1.2 mL |
慢病毒包裝所需其他材料（選用）
1）DMEM：Yeasen
2）FBS：Yeasen
3）Penicillin-Stretomycin：Yeasen
4）HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及低度檢測所用工具細胞（HEK293T）
5）Antibiotics：Yeasen 用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株篩選，如Puromycin，G418等
6）Competent cells：Yeasen
病毒包裝前的準備
慢病毒表達載體：包含病毒包裝，侵染和將病毒重組基因整合到基因組DNA中以便表達目的基因或者shRNA的基本元件。
DNA溶液的制備：以質(zhì)粒抽提試劑盒提取慢病毒包裝系統(tǒng)中各種質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒DNA溶于無菌的TE或ddH2O中，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證所提質(zhì)粒DNA 的A260/A280在1.8～2.0之間。
細胞狀態(tài)：良好的細胞狀態(tài)對病毒的包裝至關(guān)重要，避免細胞培養(yǎng)基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細胞，如果細胞是剛復(fù)蘇的話，最好傳兩代之后再包裝。
慢病毒包裝
翌圣生物慢病毒載體表達系統(tǒng)由pGMLV慢病毒載體和Lentiviral Mix質(zhì)粒組成。pGMLV慢載體中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他輔助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。翌圣可以根據(jù)不同的實驗?zāi)康尼槍GMLV載體改造以進行啟動子活性研究、基因表達研究、RNA干擾等研究。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白；pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調(diào)節(jié)gag和pol基因表達的調(diào)節(jié)因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒。
使用流程
制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒，重組質(zhì)粒載體和輔助質(zhì)粒載體分別進行高純度無內(nèi)毒素抽提，使用HG TransgeneTM Reagent進行共轉(zhuǎn)染293T細胞，轉(zhuǎn)染后18 h 更換為完quan培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆?？梢詽M足大部分體內(nèi)體外實驗需求。
1）293T細胞分盤：轉(zhuǎn)染前一天，將已經(jīng)長好的細胞以合適比例傳代到10 cm培養(yǎng)皿中，當(dāng)細胞長到~80%時準備轉(zhuǎn)染。
2）轉(zhuǎn)染前換液：轉(zhuǎn)染前1~2 h 將需要轉(zhuǎn)染的細胞換新鮮的培養(yǎng)基，12 mL/10 cm皿。注意：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應(yīng)小心滴加盡量避免沖起細胞。
3）轉(zhuǎn)染：取無菌的1.5 mL EP管或15 mL離心管，按下列組分配制反應(yīng)體系：
| 無血清DMEM | 1 mL |
| DNA | 10 μg |
| Lentiviral Mix | 10 μL(10 μg) |
| HG TransgeneTM Reagent | 60 μL |
混勻后，室溫放置18 min~20 min后，均勻滴加到提前換過液的培養(yǎng)皿中，后置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）換液：轉(zhuǎn)染18~20 h后，小心吸掉細胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時培養(yǎng)基中已含有少量的病毒，必須經(jīng)處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄），然后加15 mL新鮮的培養(yǎng)基（也可根據(jù)實驗要求換為無血清的DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。
5）病毒收集：換液48 h后，吸取細胞上清液于50 mL離心管，4℃，500 g離心5 min，上清液用0.45 μm濾器過濾后轉(zhuǎn)移到新的離心管中。此時上清液中的病毒顆?？梢灾苯尤z測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。
6）病毒分裝與保存：將病毒以40~50 μL分裝，后保存于-80℃。
冰袋運輸。HG TransgeneTM Reagent（41102-B）2~8 ℃保存，其余組分（41102-A、41102-C）均于-25~-15℃保存，有效期1年半。
Q:慢病毒包裝試劑盒中是否含有 pGMLV 慢病毒載體？穩(wěn)轉(zhuǎn)怎么篩選？還需要再額外購買其他質(zhì)粒嗎？
A: 含有該載體；穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選所用為Puromycin，G418；后期分選為熒光篩選；只需要客戶另外準備目的質(zhì)粒。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中 pGMLV 慢病毒載體，有質(zhì)粒（陽性對照）序列嗎？
A: 慢病毒包裝，一般用三質(zhì)粒或者四質(zhì)粒系統(tǒng)，分別構(gòu)建病毒的不同組件，我們的慢病毒包裝試劑盒，提供陽性對照的質(zhì)粒，但是：
（1）質(zhì)粒序列都不提供；
（2）質(zhì)粒的酶切位點不能提供。
Q: 為什么容易個試劑盒包裝的病毒感染成功了，有的卻感染不成功？
A:
①質(zhì)粒構(gòu)建有問題，如果不是同一個質(zhì)粒，可以質(zhì)粒測序確定質(zhì)粒是否正確，是否有移碼或者脫靶問題；
②如果質(zhì)粒沒問題，可能是慢病毒載體不正確導(dǎo)致病毒包裝不成功，我們試劑盒是兼容二代，三代的慢病毒載體；
③如果以上兩種都沒問題，可能是感染的細胞是懸浮細胞或者是貼壁不牢的細胞，可以使用聚凝胺增加病毒感染率或者是使用腺病毒包裝。
Q: 轉(zhuǎn)染試劑放-20了，還可以再用嗎？
A: 不建議用了，轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)體的，不能冰凍。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中陽性對照：eGFP 對照質(zhì)粒（Amp+）的推薦引物序列是什么？
A: GFP-qF:TGTTCACCGAGTACCCCCAG；GFP-qR:CGCCGTAGAACTTGGACTCG。
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