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探針合成實驗服務

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上海研謹生物科技有限公司提供RT-PCR技術服務、細胞培養(yǎng)技術服務、原位雜交技術服務、免疫沉淀技術服務、Western Blotting技術服務、PCR實驗服務,并為廣大科研用戶提供各種高品質的化學試劑、生物學試劑、免疫學檢測,ELISA試劑盒、生化試劑盒、分析標準品、對照品、標準物質、食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產品、獸藥殘留檢測試劑、細胞培養(yǎng)服務等,應用覆蓋藥物分析領域、食品安全領域、聚合物研究領域、環(huán)境監(jiān)測領域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測、環(huán)境測試機構、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。

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產地類別 國產 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè)

探針合成實驗服務



探針是- -小段單鏈DNA或者RNA--片段(大約是20到500 bp), 用于檢測與其互補的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈,隨后用放射性同位素(通常用磷-32)、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標記成為探針。


實驗材料

基因


試劑、試

劑盒


轉錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇


儀器、耗


水溶鍋、離心機、培養(yǎng)箱、烘箱











實驗步驟

1.在一個含SP6. T3或T7啟動子的載體中,插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質粒呈線

性。DNAL以酚/氨0仿抽提, 乙醇沉淀,70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul。

2.室溫配置如下反應混合液(總體積20μl) :

(1) 4.0 ul 5x轉錄緩)沖液

(2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

(3) 60 U RNA酶抑制劑

(4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種

(5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

(6) 10.0μ ζ[35s] UTP

(7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶

(8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。

3.在反應混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑,20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板。

4.往反應混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉,取出1 ul測定其cpm/ul值。

5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇,置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀,晾干,需要的話可重復此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。


6.確定其cpm/μl值, 并計算摻入百分比,核糖核酸探針應于2~3天內使用。

(70%到90%的標記摻入,結果可得70~90 ng標記的RNA)





收費標準/服務周期/提供結果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

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2011年開始我們致力于在生命科學領域生物醫(yī)學實驗外包及論文潤色服務,協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

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