谷胱甘肽S-轉移酶（glutathione S-transferase，GST）試劑盒說明書

紫外分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

產(chǎn)品內(nèi)容：  

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。 

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。 

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5 mL蒸餾水溶解。 

產(chǎn)品說明：

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質家族，主要存在于細胞質內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學物質及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價結合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意，GST催化的反應減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 

GST催化GSH與CDNB結合，其結合產(chǎn)物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。 

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。 

操作步驟：

一、 粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。 

二、 測定操作： 

1. 分光光度計預熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。 

2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）保溫。 

3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入100μL試劑一，900μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。 

4. 測定管：取1mL石英比色皿，加入100μL上清液，900μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A3和A4。 注意：空白管只需測定一次。