土壤亞硝酸還原酶

（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，參與亞硝酸鹽至 NO 的還原反應(yīng)，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。

測(cè)定原理

亞硝酸還原酶可將NO₂^-還原為 NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO₂^-減少，即 540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。

需自備的儀器和用品

天平、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿。

試劑的組成和配制

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 10mL 蒸餾水溶解。

試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 25mL×1 瓶，4℃避光保存。（使用前50℃加熱溶解）

試劑五：液體 25mL×1 瓶，4℃避光保存。

工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以 1:1 的比例混合。

測(cè)定操作表

土樣自然風(fēng)干或35℃烘干

計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y =0.0129x - 0.0106，R² =0.9985

酶活單位定義：每g土樣每24h還原1μmol NO²ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。

S-NiR（μmol/d/g）=[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)+0.0106]÷0.0129×V 反總÷W÷T

=930.23×[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)+0.0106]÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)

1、 配制好的試劑二和工作液3天內(nèi)使用完。

2、 若吸光值超過2，將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3、 嚴(yán)格控制顯色時(shí)間，否則會(huì)對(duì)結(jié)果有影響。