超低分子量蛋白質(zhì)Marker（3.3-20.1kD）使用說明書

貨號:MP1003

規(guī)格:15T

保存:-20℃保存，有效期為一年。

產(chǎn)品簡介:

本產(chǎn)品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質(zhì)組成，分子量范圍為3. 3kD-20. 1kD?？梢杂脕砼袛?/span>SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品為蛋白質(zhì)和多肽混合物的凍干粉，每種蛋白含量約為15-22.5μg，配有一支1×上樣緩沖液。

使用說明:

1、  開封后，溶于150 μL 1×上樣緩沖液，于95℃水浴5分鐘，可根據(jù)需要進行小量分裝，每管10μL，-20℃貯存，每次取一管使用，避免反復(fù)凍融。

2、  使用前取分裝后的小管室溫融化后，95℃預(yù)熱5分鐘即可上樣電泳，用考馬斯亮藍G-250染色后可見5條蛋白帶(見下示意圖) 。

凝膠的配置方法:

凝膠制備及染色注意事項:

1、  先配制分離膠，聚合后再配制夾層膠，后配制濃縮膠，3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時，30v跑1-2小時后，待指示前沿到達分離膠上沿時，把電壓調(diào)至100v，至電泳結(jié)束，整個電泳過程大約需要6-8小時。

1. 由于多肽所含的氨基酸數(shù)目較少，因此如該多肽含有過多的極性氨基酸(堿性或酸性)，則會影響其在SDS-PAGE圖上的條帶遷移率，即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離。
2. 由于SDS-PAGE的圖譜上，蛋白質(zhì)對數(shù)分子量和遷移率成正比直線關(guān)系的分子量范圍為15,000-200,000，因此對于分子量小于10000的蛋白質(zhì)或多肽的分子量，只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量進行估計，推斷其是否落入預(yù)測的分子量范圍。
3. 由于超低分子量多肽（3000及3000以下），極易從凝膠上浸出，因此染色及脫色時間不宜太長，脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過久，否則條帶會消失。

5、  電泳之后可將膠置于固定液中固定20分鐘，再進行染色，能得到較好的蛋白條帶；如時間不允許，也可不進行固定直接染色。如果使用配方7進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液(貨號:P1300)，該產(chǎn)品具有染色快，無毒，靈敏性高等特點，是常規(guī)染色液的替代品。

附:小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制

1、 49.5% T  3 % C (配制夾層膠和濃縮膠)

丙烯酰胺  48g

甲叉雙丙烯酰胺  1.5g

用ddH₂0溶解后定容至100mL

2、49. 5 % T  6 % C (配制分離膠)

丙烯酰胺 46. 5g

甲叉雙丙烯酰胺 3. 0g

用ddH₂0溶解后定容至100mL

3、凝膠緩沖液

Tris堿  182g

ddH₂0   300mL  

用HCl調(diào)節(jié)pH值至8.45

用ddH₂0定容至 500mL

再加入SDS  1.5g

4 、10×陽極緩沖液(下槽緩沖液〕

Tris堿 121. 1 g

ddH₂0  400mL

用HCl調(diào)pH值至8.9

用ddH₂0定容至 500mL 

5、陰極緩沖液(上槽緩沖液)

Tris堿  12 .11g

Tricine  17.92g

SDS  1g

用ddH2O定容至1000mL

此溶液不用調(diào)節(jié)pH值

6、固定液

0.5% 戊二醛

30% 乙醇

用ddH₂0定容至100mL

7、染色液

50% 甲醇

10% 乙酸

0.2% 考馬斯亮藍G-250

用ddH₂0定容至500mL

MP1003 超低分子量蛋白質(zhì)Marker(3.3-20.1kDa) 15T